Основы биотехнологии: культивирование клеток человека и животных. Цыренов В.Ж. - 9 стр.

      Контроль за развитием клеток проводят с помощью        жидкую фазу, то в газообразную, для обеспечения дыха-
прямых (подсчет) и непрямых методов (по мутности, по         тельной потребности в О2.
подсчету ядер, по определению общего белка).
      Посевной материал (от лат. Inoculation - прививание)             3.1. Глубинное выращивание клеток человека
заметно сказывается на скорости роста клеток в монослой-                          и животных в монослое
ной культуре. В случае применения первичных клеток не-
обходимо использовать посевной материал 6олее высокой             При глубинном культивировании клеток применяют
плотности на 1 см3 внутренней (рабочей) поверхности куль-    следующие условия рН 7,2 – 7,4, t 36-37,5°C. Контроль за
тиватора.                                                    развитием клеток проводят с помощью прямых (подсчет) и
      Если же используют клеточные линии (а не первичные     непрямых методов (по мутности, по определению общего
клетки), то плотность инокулята может быть несколько         белка).
меньшей, так как почти все 10% адгезируются на поверхно-          Посевной материал (инокулят, от латинского inoculatio
сти культиватора. Покачивание или вращение омываемых         – прививание), его качество сказываются на скорости роста
средой клеток несомненно сказывается на их прикреплении.     клеток. Рассмотрим в качестве примера технологии культу-
      Выбор клеток не столь велик, но некоторые из них       равания клеток человека и животных получение вирусной
вполне адаптированы к условиям выращивания in vitro. В       вакцины Солка (против полиомиелита) из тканевой культу-
1964 г. впервые были получены линии соединительно-           ры почек обезьяны. Ткань коркового слоя свежих почек из-
тканных клеток - фибробластов ВНК 21 от сирийского хо-       мельчают и суспендируют в среде №199, затем многократно
мяка. Эти клетки пассируются неограниченно долго и пер-      обрабатывают по 20 мин 0,5%-ным раствором трипсина при
воначально использовались для репродукции вируса ящура       рН среды 7,6, чтобы ферментативно гидролизовать ткани и
для приготовления соответствующих вакцин.                    разделить клетки. Суспензию центрифугируют и клетки
      Используют клетки почек кроликов, обезьян, собак,      суспендируют в той же среде с добавлением плазмы телячь-
10-14-дневных куриных эмбрионов, клетки из миндалин,         ей крови или гидролизата лактоальбумина. Суспензию кле-
аминона, легких эмбриона человека 12-16-недельного воз-      ток инкубируют 5 суток в особых сосудах, где за это время
раста, клетки эпидермиса взрослого человека, мышечные        на их стенках образуется однослойная пленка клеток.
фибробласты и др. нормальные диплоидные клетки челове-            Когда клетки вырастут, жидкую фракцию сливают,
ка могут делиться ограниченное число раз (50±10) и прояв-    клетки промывают изотоническим раствором поваренной
ляют феномен старения. В то же время такие клетки как        соли, добавляют свежую среду и засевают её соответст-
Hela, выделенные из раковой опухоли шейки матки челове-      вующим вирусом полиомиелита. После 3-суточного инку-
ка, оказывались бессмертными при пассировании.               бирования клетки полностью разрушаются, и вирусы пере-
      Клетки выращивают в строго асептичных условиях в       ходят в раствор. Остатки клеток удаляют центрифугирова-
специальном оборудовании при медленном вращении рол-         нием, и оставшийся раствор используют для вакцинации.
лерной системы и покачивании для омывания большей            Для сохранения вакцину замораживают.
площади культуральной среды. Клетки погружаются то в

                                                        17   18