Основы биотехнологии: культивирование клеток человека и животных. Цыренов В.Ж. - 11 стр.

типа гибридом. Для этого разработана спецтехнология.                              физического удаления полилизиновой мембраны можно ис-
Гибридомные клетки суспензируют и биосовместимом рас-                             пользовать ферментативный гидролиз.
творе натрия альгината. Образовывавшиеся капельки затем                                 В описанные микросферы возможно инкапсулировать
пропускают в раствор кальция хлорида (CaCl2), где они ста-                        не только клетки, но и ферменты, индукторы каких-либо
новятся желированными микросферами. На поверхности                                процессов, а также мультисистем.
таких сред затем формируют полилизиновую мембрану.                                      Таким образом, глубинное выращивание животных
После этого гель разжижают, оставляя гибридомные клетки                           клеток реализуют в трех вариантах:
в нормальном физиологическом состоянии внутри «дырча-                                   1. монослой клеток статичен, культуральная фаза под-
тых» микросфер. При культивировании инкапсулированных                             вижна;
гибридом продукция моноклональных антител возрастает в                                  2. среда культивирования статична, монослой клеток
тысячи раз по сравнению с обычным культивированием                                подвижен;
гибридомных клеток. После завершения биосинтеза антител                                 3. клетки (например, на микроносителе в микросфе-
микрокапсулы подвергают диализу для удаления примесей                             рах) и среда культивирования подвижна.
веществ, а затем физически из «раскрывают», гибридомные                                 Эти варианты надо иметь в виду при выборе техноло-
клетки и фрагменты капсул легко сепарируются от искомых                           гии и проектировании оборудования.
моноклональных антител, которые могут быть подвергнуты                                  В опытно-промышленных условиях получают интер-
дополнительной очистке или использованию по назначению                            ферон, выращивая микробласты человека в виде отъемно-
(рис. 5).                                                                         доливных культур, т.е. когда определенная часть клеточной
                                                                                  суспензии замещается свежей средой, например, ultroser HY
                                                                                  (Германия), а оставшаяся часть «старой» культуры выпол-
                                                                                  няет роль инокулята.
                                                                                        Неопределенно длительное время можно выращивать
                                                                                  клетки млекопитающих в непрерывных хемостатных куль-
                                                                                  турах. В хемостатах скорость подачи свежей среды и отбора
                                                                                  кульутры равны (как и объем их). Скорость роста клеток
Р и с . 5 . Получение моноклональных антител с помощью инкапсулированных          контролируется скоростью подвода лимитирующего ком-
            клеток гибридомы (схема): 1 – клетки гибридомы; 2 - клетки гибридо-
            мы в растворе натрия альгината; 3 – клетки гибридомы в ээ растворе    понента, а численность – его концентрацией. В качестве
            кальция хлорида; 4 – клетки гибридом в «дырчатых» микросферах; 5 –    лимитирующего рост агента чаще всего используют глюко-
            антитела и клетки-гибридомы после разрушения полилизиновой мем-       зу, реже – фосфаты и другие вещества. В хемостатах удает-
            браны
                                                                                  ся на порядок увеличить выход клеток по сравнению с пе-
     Полилизиновая мембрана обеспечивает диффузию не-                             риодическим культивированием. Причем, хемостатные
больших молекул питательных веществ внутрь микросфер,                             культуры отличаются накоплением физиологически одно-
но не позволяет диффузию иммунным глобулинам. Кроме                               типных клеток. Это можно показать на примере с клетками
                                                                                  лейкемии мышей - L 1210 (таблица 2),которые засевали

                                                                            21    22