Методические указания к самостоятельной работе и лабораторному практикуму по физической химии "Хроматографические методы анализа". Цыренова С.Б - 10 стр.

       Заключительной стадией хроматографического анализа смеси веществ является каче-
ственный и количественный анализы полученной хроматограммы. Хроматограмма, полу-
ченная на адсорбенте белого цвета, представляет собой серию цветных зон, расположенных
в определенном порядке. Визуальное исследование такой хроматограммы дает ориентиро-
вочное представление о составе исследуемой смеси. Если разделяемые вещества флюорес-
цируют в ультрафиолетовом свете, расположение зон в колонке можно определить при по-
мощи облучения ее УФ- лучами.
       Выявление зон бесцветных веществ осуществляются методом проявления хромато-
грамм. Для этого через хроматографическую колонку пропускают раствор, который дает ок-
рашивание зон, или перед началом хроматографии адсорбент обрабатывается соответствую-
щим индикатором, который изменяет свою окраску в зависимости от среды образовавшейся
зоны.
       Количественный анализ хроматограммы целесообразно проводить лишь в том случае,
когда осуществлено полное разделение смеси и хроматограмма состоит из серии отдельных
непрерывающихся зон.
       Количественный анализ результатов разделения сводится к определению количества
вещества, содержащегося в каждой обнаруженной зоне. Ориентировочные данные можно
получить, измеряя ширину полосы при стандартном сорбенте, откалиброванном по данному
веществу при постоянных условиях. Для этой цели может быть использовано измерение ди-
электрической постоянной по длине колонки или применение метода счета импульсов при
работе с радиоактивными изотопами.
       Наибольшее распространение имеет метод фронтального анализа. При рациональном
подборе вытеснителя обеспечивается последовательность появления отдельных компонентов
смеси в фильтрате. В простейшем случае производится количественный и качественный ана-
лиз отдельных порций фильтрата. Метод отбора проб позволяет не только констатировать
разделение, но и количественно выделять вымываемые из колонны вещества.
       Качественный анализ бумажных хроматограмм производится в основном такими же
методами, что и анализ колоночных хроматограмм. Простым и убедительным способом ана-
лиза бумажных хроматограмм является способ свидетелей. Согласно этому способу на одной
и той же полосе бумаги хроматографируют исследуемую смесь веществ и отдельно набор
веществ, присутствие которых в исследуемой смеси предполагается. Растворы наносят на
бумагу в один раз. После окончания хроматографирования и проявления зон производится
визуальное сопоставление положения пятен известных веществ с положением пятен неиз-
вестных веществ. Для бумажной хроматографии используют специальные сорта
фильтровальной бумаги.
       В этом случае неподвижной фазой является вода, адсорбированная бумагой, или ор-
ганическая жидкость, которой бумага пропитана. Иногда бумагу модифицируют, например,
обрабатывают уксусным ангидридом. При этом гидроксильные группы целлюлозы превра-
щаются в сложноэфирные, что приводит к изменению сорбционных свойств бумаги.
       Поток элюента может перемещаться вверх по полоске бумаги, благодаря капилляр-
ным силам (восходящая хроматография) или вниз самотеком (нисходящая хроматография).
       Зоны отдельных компонентов проявляются в виде пятен. При работе с неокрашенны-
ми веществами приходится “проявлять” хроматограмму обработкой соответствующим реак-
тивом, дающим цветную реакцию с компонентом смеси. В случае люминесцирующих ве-
ществ, зоны можно наблюдать, освещая хроматограмму ультрафиолетовым светом. Положе-
ние пятна каждого компонента характеризуется фактором замедления Rf, величина которого
зависит от методики разделения, элюента и природы вещества. Фактор замедления рассчи-
тывается по формуле:
                                                 a
                                            Rf = ,
                                                 b
       где а- расстояние от линии нанесения веществ (линия старта) до центра пятна, обна-
руженного на хроматограмме;