Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 19 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

19
Комментарии к методике:
1) Использовать гель в течение ~2 часов, либо, не вынимая гребёнку, завернуть в
SaranWrap, убрать в холодильник (можно хранить в течение месяца; для < 1% гелей
вынимать гребенку из геля можно лишь непосредственно перед применением).
2) При работе с короткими по длине фрагментами ДНК можно использовать ТВЕ бу-
фер (50х
: 1М Трис-HCI, 0.9М борной кислоты, 1мМ ЭДТА, довести рН до 8.5), спо-
собствующий их лучшему разделению.
Раздел 2. Методы анализа нуклеиновых кислот
Глава I. Обратная транскрипция
Обратная транскрипция – перенос информации с РНК на ДНК, про-
цесс, обратный нормальной транскрипции, осуществляемый ферментом
обратной транскриптазой.
Обратная транскриптаза (ревертаза, РНКзависимая ДНКполимераза) –
фермент класса трансфераз, осуществляющий ДНК-зависимый синтез
ДНК и синтез ДНК на матрице РНК (обратная транскрипция). Кроме того,
обратная транскриптаза обладает активностью РНКазы Н (т.е. разрушает
цепь
РНК, входящую в состав ДНК/РНК-дуплекса). Подобно всем ДНК-
полимеразам, обратная транскриптаза способна функционировать только
при наличии затравки.
In vivo обратная транскриптаза синтезирует двухце-
почечную ДНК на матрице геномной РНК ретровирусов, подготавливая ее
для интеграции в геном клетки-хозяина. Обратная транскриптаза широко
используется в генной инженерии для клонирования последовательностей
нуклеотидов мРНК эукариот. Впервые обнаружена в 1970.
В результате работы ревертазы образуется комплементарная ДНК
(кДНК), образующаяся на основе клеточной матричной РНК (
мРНК). Для 
Комментарии к методике:
1) Использовать гель в течение ~2 часов, либо, не вынимая гребёнку, завернуть в
   SaranWrap, убрать в холодильник (можно хранить в течение месяца; для < 1% гелей
   вынимать гребенку из геля можно лишь непосредственно перед применением).
2) При работе с короткими по длине фрагментами ДНК можно использовать ТВЕ бу-
   фер (50х: 1М Трис-HCI, 0.9М борной кислоты, 1мМ ЭДТА, довести рН до 8.5), спо-
   собствующий их лучшему разделению.




 Раздел 2. Методы анализа нуклеиновых кислот

                    Глава I. Обратная транскрипция


      Обратная транскрипция – перенос информации с РНК на ДНК, про-
цесс, обратный нормальной транскрипции, осуществляемый ферментом
обратной транскриптазой.
      Обратная транскриптаза (ревертаза, РНКзависимая ДНКполимераза) –
фермент класса трансфераз, осуществляющий ДНК-зависимый синтез
ДНК и синтез ДНК на матрице РНК (обратная транскрипция). Кроме того,
обратная транскриптаза обладает активностью РНКазы Н (т.е. разрушает
цепь РНК, входящую в состав ДНК/РНК-дуплекса). Подобно всем ДНК-
полимеразам, обратная транскриптаза способна функционировать только
при наличии затравки. In vivo обратная транскриптаза синтезирует двухце-
почечную ДНК на матрице геномной РНК ретровирусов, подготавливая ее
для интеграции в геном клетки-хозяина. Обратная транскриптаза широко
используется в генной инженерии для клонирования последовательностей
нуклеотидов мРНК эукариот. Впервые обнаружена в 1970.
      В результате работы ревертазы образуется комплементарная ДНК
(кДНК), образующаяся на основе клеточной матричной РНК (мРНК). Для

                                        19

Страницы