Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 18 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

18
Для разделения нуклеиновых кислот применяют различные концен-
трации геля, в зависимости от длины исследуемой НК. Диапазон нормаль-
ного разделения линейных ДНК молекул для гелей с различной концен-
трацией агарозы приведен в таблице.
Таблица 1
Зависимость разделения линейных молекул ДНК от концентрации
агарозного геля
% агарозы
0.3 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.2 1.5
Размер
ДНК [kbp]
5–60 1–30 1–20
0.8–
12
0.6–
10
0.5–8 0.5–7 0.4–6 0.2–3
Работа 7. Методика электрофореза нуклеиновых кислот в агарозном
геле
1. Взвесить необходимое количество агарозы (ее количество зависит от
концентрации используемого геля).
2.
Долить 1х ТАЕ буфер до нужного объёма (можно использовать кон-
центрированный – 50х ТАЕ – буфер (
2М Tris-HCI, 5.71 % ледяной
уксусной кислоты, 2мМ EDТА, довести рН до 8.5
).
3.
Довести до кипения, кипятить до полного растворения агарозы.
4.
Остудить до 50–60
o
С (можно держать банку в руках), добавить бро-
мистый этидий до концентрации 0,1 %.
5.
Залить форму, дать агарозе застыть в течение 0.5–1 часа.
6.
В кармашки внести образцы НК, предварительно добавив буфер для
электрофореза (
0.1% бромфеноловый синий, 0.1% ксиленцианол, 60%
глицерин, 60мМ ЭДТА
).
7.
Нагрузка выбирается из расчета 6–10 В на 1 см геля. 
        Для разделения нуклеиновых кислот применяют различные концен-
трации геля, в зависимости от длины исследуемой НК. Диапазон нормаль-
ного разделения линейных ДНК молекул для гелей с различной концен-
трацией агарозы приведен в таблице.
                                                                      Таблица 1
       Зависимость разделения линейных молекул ДНК от концентрации
                                 агарозного геля
% агарозы     0.3   0.5    0.6       0.7       0.8     0.9     1.0     1.2     1.5
Размер                              0.8–       0.6–
             5–60   1–30   1–20                       0.5–8   0.5–7   0.4–6   0.2–3
ДНК [kbp]                            12        10




Работа 7. Методика электрофореза нуклеиновых кислот в агарозном
геле

  1. Взвесить необходимое количество агарозы (ее количество зависит от
        концентрации используемого геля).
  2. Долить 1х ТАЕ буфер до нужного объёма (можно использовать кон-
        центрированный – 50х ТАЕ – буфер (2М Tris-HCI, 5.71 % ледяной
        уксусной кислоты, 2мМ EDТА, довести рН до 8.5).
  3. Довести до кипения, кипятить до полного растворения агарозы.
  4. Остудить до 50–60 oС (можно держать банку в руках), добавить бро-
        мистый этидий до концентрации 0,1 %.
  5. Залить форму, дать агарозе застыть в течение 0.5–1 часа.
  6. В кармашки внести образцы НК, предварительно добавив буфер для
        электрофореза (0.1% бромфеноловый синий, 0.1% ксиленцианол, 60%
        глицерин, 60мМ ЭДТА).
  7. Нагрузка выбирается из расчета 6–10 В на 1 см геля.


                                          18

Страницы