Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 16 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

16
Работа 6. Определение чистоты препарата ДНК или РНК
Отношение поглощения при длинах волн 260 нм и 280 нм
(260–280 нм) показывает чистоту препарата ДНК или РНК. Препарат счи-
тается чистым, если отношение значений 260 / 280 нм приблизительно
равно 1.8 для ДНК и 2.8 для РНК. В случае меньших значений показателя
260–280 нм препарат содержит большое количество примесей белка, фено
-
ла или иных контаминирующих агентов, имеющих значительное поглоще-
ние при 280 нм.
ДНК РНК
А
260
/А
280
= 1.8 А
260
/А
280
= 2.8
Другим показателем чистоты препарата ДНК или РНК является от-
ношение значений поглощения 260–230 нм. В случае чистого препарата
это соотношение обычно равно 1.8 – 2.2. Меньшие значения коэффициента
260/230 нм свидетельствуют о загрязнении препарата компонентами, кото-
рые остаются после процедуры выделения ДНК или РНК.
А260
1.8 2.2
А230
≤≤
Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле
Для нуклеиновых кислот широко применяется метод гель-
электрофореза. Его принцип заключается в следующем. Исследуемый пре-
парат (раствор ДНК или РНК) вносят в лунку, расположенную у края геля.
Находящиеся в буферном растворе макромолекулы обладают некоторым
суммарным электрическим зарядом, и когда через гель пропускают элек-
трический ток, они перемещаются в электрическом поле.
Для учета результатов выделения нуклеиновых кислот среднего раз-
мера обычно применяют агарозные гели
в присутствии специфического 
Работа 6. Определение чистоты препарата ДНК или РНК

     Отношение поглощения при длинах волн 260 нм и 280 нм
(260–280 нм) показывает чистоту препарата ДНК или РНК. Препарат счи-
тается чистым, если отношение значений 260 / 280 нм приблизительно
равно 1.8 для ДНК и 2.8 для РНК. В случае меньших значений показателя
260–280 нм препарат содержит большое количество примесей белка, фено-
ла или иных контаминирующих агентов, имеющих значительное поглоще-
ние при 280 нм.
                  ДНК                                     РНК

            А260/А280 = 1.8                         А260/А280 = 2.8

     Другим показателем чистоты препарата ДНК или РНК является от-
ношение значений поглощения 260–230 нм. В случае чистого препарата
это соотношение обычно равно 1.8 – 2.2. Меньшие значения коэффициента
260/230 нм свидетельствуют о загрязнении препарата компонентами, кото-
рые остаются после процедуры выделения ДНК или РНК.

                                       А260
                               1.8 ≤        ≤ 2.2
                                       А230

           Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле
     Для     нуклеиновых      кислот    широко      применяется       метод   гель-
электрофореза. Его принцип заключается в следующем. Исследуемый пре-
парат (раствор ДНК или РНК) вносят в лунку, расположенную у края геля.
Находящиеся в буферном растворе макромолекулы обладают некоторым
суммарным электрическим зарядом, и когда через гель пропускают элек-
трический ток, они перемещаются в электрическом поле.
     Для учета результатов выделения нуклеиновых кислот среднего раз-
мера обычно применяют агарозные гели в присутствии специфического

                                        16

Страницы