Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 30 стр.

Рис. 9. Принцип детекции ПЦР-продуктов с использованием зондов
              Taqman. Ф – флюорофор. Г – гаситель

2. Метод с использованием зондов с комплементарными концевыми по-
следовательностями (Molecular Beacons). Данная методика отличается
от описанной выше лишь тем, что концевые последовательности зонда
представляют собой взаимно комплементарные области из 5–6 основа-
ний, вследствие чего они находятся в замкнутом состоянии и образуют
«шпильки». Внутренняя часть зондов содержит нуклеотидную последо-
вательность, комплементарную амплифицируемой области. «Шпилька»
зонда в процессе ПЦР денатурирует, и концы зонда (флуоресцентная
метка и гаситель) расходятся в разные стороны, и он специфически при-
соединяется к матрице. Затем под действием 5’-эндонуклеазной актив-
ности Taq-полимеразы, достраивающей новую цепь ДНК от праймера,
зонд разрезается, флуорофор оказывается свободным от гасителя. В ре-
зультате увеличивается интенсивность свечения. При отсутствии спе-


                                30