Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 28 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

28
c) все, кроме матрицы. Хранить при –70
o
С и –20
o
С продолжительное время, при
4
o
С не более суток. Однократное замораживание-оттаивание не меняет эффек-
тивность работы Taq-полимеразы.
5) Если в методике предусмотрено использование масла, то после проведения ПЦР
можно избавиться от него следующим способом:
• заморозить на –20
o
С. Вода замёрзнет, масло – нет;
• можно дополнительно сполоснуть охлаждённым (~4
o
С) хлороформом.
Глава III. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
(Real-Time PCR)
Данные методы основаны на использовании флуорофоров – молекул,
обладающих способностью к флуоресценции в результате поглощения
энергии света определенной длины волны и излучать ее на другой длине
волны. Для большинства флуорофоров существуют соединения-гасители,
молекулы которых, находясь в непосредственной близости с ними, значи-
тельно снижают уровень флуоресценции. Они как бы перехватывают на
себя энергию излучения от флуорофора. Различают два основных типа га-
сителей – флуоресцирующие и «темновые». В первом случае переданная
гасителю энергия излучается в виде света, отличающегося от свечения
свободного от гасителя флуорофора, а во втором – рассеивается в виде
тепла, т.е. свечение отсутствует. Эффект гашения резко снижается при уве-
личении расстояния между
молекулами флуорофора и гасителя.
Основные преимущества детекции продуктов ПЦР заключаются в
следующем: в отличие от электрофорезной детекции, полученные в ходе
ПЦР ампликоны, не могут попасть в воздух и привести к появлению лож-
ноположительных результатов. Использование специальных флуоресцент-
ных меток позволяет отказаться от стадии электрофореза, что ведет к рез-
    c) все, кроме матрицы. Хранить при –70 oС и –20 oС продолжительное время, при
    4 oС не более суток. Однократное замораживание-оттаивание не меняет эффек-
    тивность работы Taq-полимеразы.
5) Если в методике предусмотрено использование масла, то после проведения ПЦР
   можно избавиться от него следующим способом:
    • заморозить на –20 oС. Вода замёрзнет, масло – нет;
    • можно дополнительно сполоснуть охлаждённым (~4 oС) хлороформом.




   Глава III. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
                               (Real-Time PCR)


      Данные методы основаны на использовании флуорофоров – молекул,
обладающих способностью к флуоресценции в результате поглощения
энергии света определенной длины волны и излучать ее на другой длине
волны. Для большинства флуорофоров существуют соединения-гасители,
молекулы которых, находясь в непосредственной близости с ними, значи-
тельно снижают уровень флуоресценции. Они как бы перехватывают на
себя энергию излучения от флуорофора. Различают два основных типа га-
сителей – флуоресцирующие и «темновые». В первом случае переданная
гасителю энергия излучается в виде света, отличающегося от свечения
свободного от гасителя флуорофора, а во втором – рассеивается в виде
тепла, т.е. свечение отсутствует. Эффект гашения резко снижается при уве-
личении расстояния между молекулами флуорофора и гасителя.
      Основные преимущества детекции продуктов ПЦР заключаются в
следующем: в отличие от электрофорезной детекции, полученные в ходе
ПЦР ампликоны, не могут попасть в воздух и привести к появлению лож-
ноположительных результатов. Использование специальных флуоресцент-
ных меток позволяет отказаться от стадии электрофореза, что ведет к рез-
                                         28

Страницы