Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 26 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

26
Для проведения полимеразной цепной реакции необходимо под-
готовить смесь, содержащую все необходимые компоненты для по-
строения новой цепи ДНК:
1)
нуклеотиды: dATP, dGTP, dUTP, dCTP, являются необходи-
мыми компонентами смеси и субстратами для ДНК-
полимеразы при построении новой цепи ДНК;
2)
кофакторы фермента: поскольку Taq-ДНК-полимераза явля-
ется Mg-зависимым ферментом, для ее нормального функ-
ционирования требуется присутствие этих ионов в реакци-
онной смеси;
3)
Taq-ДНК-полимераза: фермент, осуществляющий синтез
новой цепи ДНК на основе ДНК-матрицы;
4)
буфер: используется для поддержания необходимого значе-
ния рН среди и концентрации солей;
5)
праймеры: короткие нуклеотидные последовательности
ДНК (20–40 нуклеотидов), комплементарные искомому уча-
стку ДНК-матрицы;
6)
ДНК-матрица: последовательность ДНК, на основе которой
ДНК-полимераза синтезирует новую цепь.
Работа 9. Методика проведения полимеразной цепной реакции
1.
Подготовить все необходимые реагенты для проведения ПЦР.
2.
В стерильной пробирке смешать компоненты в следующих соот-
ношениях: 
     Для проведения полимеразной цепной реакции необходимо под-
готовить смесь, содержащую все необходимые компоненты для по-
строения новой цепи ДНК:
       1) нуклеотиды: dATP, dGTP, dUTP, dCTP, являются необходи-
          мыми компонентами смеси и субстратами для ДНК-
          полимеразы при построении новой цепи ДНК;
       2) кофакторы фермента: поскольку Taq-ДНК-полимераза явля-
          ется Mg-зависимым ферментом, для ее нормального функ-
          ционирования требуется присутствие этих ионов в реакци-
          онной смеси;
       3) Taq-ДНК-полимераза: фермент, осуществляющий синтез
          новой цепи ДНК на основе ДНК-матрицы;
       4) буфер: используется для поддержания необходимого значе-
          ния рН среди и концентрации солей;
       5) праймеры:   короткие   нуклеотидные   последовательности
          ДНК (20–40 нуклеотидов), комплементарные искомому уча-
          стку ДНК-матрицы;
       6) ДНК-матрица: последовательность ДНК, на основе которой
          ДНК-полимераза синтезирует новую цепь.



Работа 9. Методика проведения полимеразной цепной реакции



     1. Подготовить все необходимые реагенты для проведения ПЦР.
     2. В стерильной пробирке смешать компоненты в следующих соот-
       ношениях:




                                 26

Страницы