Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 24 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

24
Открытие ПЦР было обусловлено расшифровкой нуклеотидных по-
следовательностей генома ряда микроорганизмов и обнаружением термо-
устойчивой Taq-ДНК-полимеразы. Данный фермент находится в живущих
в горячих источниках бактериях
Thermus aquaticus, обладает исключи-
тельной термостойкостью и сохраняет ферментативную активность в тече-
ние 40 минут при температуре 95° и имеет оптимум работы при 70–72°.
ПЦР – это процесс, состоящий из многократно повторяющихся цик-
лов и заканчивающийся получением большого количества копий специфи-
ческого фрагмента ДНК. Ключевым компонентом реакции, помимо Taq-
ДНК-полимеразы, являются короткие (20–30 нуклеотидов) искусственно
синтезированные олигонуклеотиды –
праймеры, комплементарные иско-
мым участкам на левой и правой границах матричной ДНК. Праймеры вы-
полняют ряд важных функций при проведении ПЦР: 1) праймеры являются
точкой инициации синтеза новой цепи ДНК, 2) достраивание новой цепи
ДНК протекает только между ними, 3) гибридная двуцепочечная система
ДНК-праймер является местом присоединения ДНК-полимеразы к матрице.
ПЦР проводят
в специальном программируемом термостате – амплифи-
каторе, осуществляющем смену температурных циклов по заданной програм-
ме. Основным компонентом ДНК-амплификатора является элемент Пэльтье,
способный осуществлять быстрые температурные переходы. Каждый цикл
ПЦР состоит из 3 этапов. На этапе денатурации при 95° происходит плавление
цепочки ДНК и расхождение ее на две цепи. На последующем этапе отжига
при наличии в пробе искомого участка ДНК происходит присоединение (от-
жиг) праймеров (по одному на каждую цепь). Температура присоединения
праймеров составляет в зависимости от их нуклеотидного состава 58–62°. При
последующем подъеме температуры до 72° активируется Taq-ДНК-
полимераза и начинается этап синтеза, заключающийся в присоединении де-
зоксинуклеотидтрифосфатов и достраивании фрагмента ДНК. Образовавшие-
ся в
первом цикле амплификации новые цепи ДНК служат матрицами для вто-
     Открытие ПЦР было обусловлено расшифровкой нуклеотидных по-
следовательностей генома ряда микроорганизмов и обнаружением термо-
устойчивой Taq-ДНК-полимеразы. Данный фермент находится в живущих
в горячих источниках бактериях Thermus aquaticus, обладает исключи-
тельной термостойкостью и сохраняет ферментативную активность в тече-
ние 40 минут при температуре 95° и имеет оптимум работы при 70–72°.
     ПЦР – это процесс, состоящий из многократно повторяющихся цик-
лов и заканчивающийся получением большого количества копий специфи-
ческого фрагмента ДНК. Ключевым компонентом реакции, помимо Taq-
ДНК-полимеразы, являются короткие (20–30 нуклеотидов) искусственно
синтезированные олигонуклеотиды – праймеры, комплементарные иско-
мым участкам на левой и правой границах матричной ДНК. Праймеры вы-
полняют ряд важных функций при проведении ПЦР: 1) праймеры являются
точкой инициации синтеза новой цепи ДНК, 2) достраивание новой цепи
ДНК протекает только между ними, 3) гибридная двуцепочечная система
ДНК-праймер является местом присоединения ДНК-полимеразы к матрице.
     ПЦР проводят в специальном программируемом термостате – амплифи-
каторе, осуществляющем смену температурных циклов по заданной програм-
ме. Основным компонентом ДНК-амплификатора является элемент Пэльтье,
способный осуществлять быстрые температурные переходы. Каждый цикл
ПЦР состоит из 3 этапов. На этапе денатурации при 95° происходит плавление
цепочки ДНК и расхождение ее на две цепи. На последующем этапе отжига
при наличии в пробе искомого участка ДНК происходит присоединение (от-
жиг) праймеров (по одному на каждую цепь). Температура присоединения
праймеров составляет в зависимости от их нуклеотидного состава 58–62°. При
последующем    подъеме    температуры    до 72°   активируется   Taq-ДНК-
полимераза и начинается этап синтеза, заключающийся в присоединении де-
зоксинуклеотидтрифосфатов и достраивании фрагмента ДНК. Образовавшие-
ся в первом цикле амплификации новые цепи ДНК служат матрицами для вто-
                                    24

Страницы