Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 7 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

7
фат натрия, также вызывающий лизис клеток и ингибирование клеточных
нуклеаз.
Применение фенола и хлороформа при выделении НК способствует
созданию двухфазной системы. Фенол отделяет белки от ДНК. Хлороформ
денатурирует белок и липиды и помогает поддерживать разделение орга-
нической и водной фазы, а также делает ДНК менее растворимой в феноле.
При pH 7–8, происходит растворение
ДНК и РНК в водной фазе, в то вре-
мя как белки образуют непрозрачный слой между фазами. В кислых усло-
виях (рН < 5), суммарная РНК остается в верхней водной фазе, в то время
как большая часть ДНК и белков остается или в интерфазе, или в органи-
ческой фазе. Суммарная РНК
впоследствии может быть выделена осажде-
нием с изопропиловым спиртом. Регулируя содержание фенола и его pH,
можно добиться разделения ДНК и РНК между собой, при этом ДНК будет
находиться в органической фазе, в то время как РНК будет в водной фазе.
На данной стадии возможно добавление изоамилового спирта, чтобы пре-
дотвратить вспенивание.
Добавление
одновалентных катионов (K, Na, NH
4
) при выделении
НК приводит к формированию соли с отрицательно заряженными нуклеи-
новыми кислотами. Добавление спирта (этанол или изопропиловый спирт)
приводит к обратимой денатурации нуклеиновых кислот. LiCl часто ис-
пользовался, чтобы денатурировать РНК, хотя осаждение со спиртом и од-
новалентным катионом типа натрия или иона аммония намного более ши-
роко используется. Осаждение LiCl
имеет преимущества перед другими
методами осаждения РНК, в которых не происходит эффективного удале-
ния ДНК, белок или углеводы. Другое преимущество состоит в том, что
литиевое осаждение эффективно удаляет несвязанные нуклеотидфосфаты,
которые учитываются при количественном анализе концентрации методом
спектрофотометрии. 
фат натрия, также вызывающий лизис клеток и ингибирование клеточных
нуклеаз.
     Применение фенола и хлороформа при выделении НК способствует
созданию двухфазной системы. Фенол отделяет белки от ДНК. Хлороформ
денатурирует белок и липиды и помогает поддерживать разделение орга-
нической и водной фазы, а также делает ДНК менее растворимой в феноле.
При pH 7–8, происходит растворение ДНК и РНК в водной фазе, в то вре-
мя как белки образуют непрозрачный слой между фазами. В кислых усло-
виях (рН < 5), суммарная РНК остается в верхней водной фазе, в то время
как большая часть ДНК и белков остается или в интерфазе, или в органи-
ческой фазе. Суммарная РНК впоследствии может быть выделена осажде-
нием с изопропиловым спиртом. Регулируя содержание фенола и его pH,
можно добиться разделения ДНК и РНК между собой, при этом ДНК будет
находиться в органической фазе, в то время как РНК будет в водной фазе.
На данной стадии возможно добавление изоамилового спирта, чтобы пре-
дотвратить вспенивание.
     Добавление одновалентных катионов (K, Na, NH4) при выделении
НК приводит к формированию соли с отрицательно заряженными нуклеи-
новыми кислотами. Добавление спирта (этанол или изопропиловый спирт)
приводит к обратимой денатурации нуклеиновых кислот. LiCl часто ис-
пользовался, чтобы денатурировать РНК, хотя осаждение со спиртом и од-
новалентным катионом типа натрия или иона аммония намного более ши-
роко используется. Осаждение LiCl имеет преимущества перед другими
методами осаждения РНК, в которых не происходит эффективного удале-
ния ДНК, белок или углеводы. Другое преимущество состоит в том, что
литиевое осаждение эффективно удаляет несвязанные нуклеотидфосфаты,
которые учитываются при количественном анализе концентрации методом
спектрофотометрии.


                                   7

Страницы