Идентификация и исследование экспрессии генов. Епринцев А.Т - 6 стр.

бактериальными клетками) возникает необходимость применения допол-
нительных компонентов для избавления от клеточной стенки (лизирующие
ферменты, детергенты и т. д.).
     После разрушения образца возникает необходимость очистки нук-
леиновых кислот от других компонентов клеток. Для этого существуют
различные методы, основанные на специфических свойствах нуклеиновых
кислот. Наиболее часто используется очистка НК методом фенол-
хлороформной экстракции, основанной на различной растворимости НК в
растворителях разной природы. Кроме того, применяются методы, осно-
ванные на способности НК адсорбироваться на специфических носителях с
последующей их элюцией.


           Глава I. Выделение и очистка нуклеиновых кислот


     Метод стал широко использоваться для выделения НК из биологиче-
ских образцов различных источников. Данный метод позволяет выделять в
чистом виде не только суммарною вытяжку НК, но и разделить между со-
бой ДНК и РНК. Принципиальная основа метода заключается в том, что
НК имеет высокую растворимость в водной фазе, в то время как большая
часть белков, углеводов и других компонентов клетки растворяются в ор-
ганических растворителях.
     На первой стадии происходит суммарное выделение РНК и ДНК, в
присутствии гуанидин изотиоционата, ацетата натрия и других компонен-
тов. Гуанидин изотиоционат – один из самых мощных денатурантов белка.
Очень эффективен при очистке РНК из-за его способности быстро прони-
кать в клетки и подавлять активность РНКаз. Гуанидин изотиоционат, ис-
пользуемый комбинации со смесью фенол-хлороформ и осаждением спир-
та, что обеспечивает получение качественной неповрежденной РНК. Кро-
ме того, вместо гуанидин изотиоцианата часто используется додецилсуль-
                                  6