Герпетическая инфекция: вопросы патогенеза, методические подходы к терапии. Ершов Ф.И - 74 стр.

разводили в 1 мл питательной среды, содержащей 1% сыворотки крупного рога-
того скота, 5 мкг/мл фугизона, 80 мкг/мл гентамицина и готовили ряд разведе-
ний: от 10-1 до 10-4.
    Культуру клеток карциномы легкого человека А549 засевали в 96-луночные
планшеты по 100 мкл в лунку в концентрации 2Χ105 кл/мл и культивировали
при 370С в атмосфере 5% СО2 до образования монослоя.
    Клеточный монослой отмывали от ростовой среды раствором Хенкса и в ка-
ждую лунку добавляли по 100 мкл соответствующих разведений вирусного ино-
кулята, инкубировали 1 час при 370С в атмосфере 5 % СО2, затем доводили объ-
ем до 200 мкл поддерживающей средой, содержащей 1 % сыворотки крупного
рогатого скота, 5 мкг/мл фунгизона, 80 мкг/мл гентамицина. На каждое разведе-
ние исследуемого материала отводилось по 4 лунки. Учет результатов прово-
дился на 7 сутки по наличию специфического вирусного ЦПД, с определением
титров вируса, вызывающих поражение клеток в культуре.
    Для выделения вируса из ткани мозга участок ствола мозга, изолированного
на 11 день после заражения, объемом 1 см3 был растерт в ступке и разведен в 3
мл поддерживаемой среды. Материал был центрифугирован в течение 30 мин
при 6 000 об/мин, и из надосадка приготовлены серии разведений от 10-1 до 10-5.

          Гистологическое и электронномикроскопическое
              исследование течения офтальмогерпеса
    Глазные яблоки животных, погибших в ходе опыта и выживших до конца
эксперимента, фиксировали в жидкости Буэна, обезвоживали и заливали в пара-
фин. Из приготовленных блоков готовили срезы толщиной 3-4 мкм окрашивали
гематоксилином и эозином и анализировали под световым микроскопом. Мор-
фологическому исследованию подвергали комплексы, состоящие из роговицы,
конъюнктивы, радужной оболочки и передних отделов сетчатки.
    Параллельные препараты готовили для исследования под электронным мик-
роскопом. Для этого участки роговицы фиксировали 2,5 % раствором глутарово-
го адельгида на какодилатном буфере с последующей дофиксацией четырехоки-
сью осмия и контрастированием уранилацетатом, обезвоживанием и заливкой в
эпон. Ультратонкие срезы тканей контрастировали цитратом свинца и исследо-
вали под электронным микроскопом JEM-100S при ускоряющем напряжении 80
кВ.

            Клиническое течение экспериментального
                   герпетического кератита
    У всех кроликов в зоне “инфицированных” насечек роговицы на третий день
эксперимента развился острый кератит, клинически выраженный в виде герпе-
тического древовидного (у 8 животных: 61,5%) или не имеющего специфики
округлого инфильтрата, достигающего 4-5 мм в диаметре (38,5%). Во всех слу-
чаях роговичные изменения сопровождались выраженной воспалительной реак-
цией со стороны конъюнктивы (хемоз, смешанная инъекция сосудов, слизистое

76