Экспертиза алкогольного опьянения. Евстигнеева В.П - 24 стр.

                                     24

месте” осуществляется почти или точно в режиме реального времени; это
позволяет без промедления начать действия по устранению последствий
происшествий, не дожидаясь проведения анализа в лаборатории и
соответствующих лабораторных данных. Ниже приведены примеры некоторых
тест-систем, используемых в России и за рубежом.
      Для определения спиртов чаще всего используют ферментативные
реакции с алкогольоксидазой как селективным ферментом. Если используют
бумажные полоски, то в зависимости от использованного хромогенного
реагента тест-полоска в присутствии спиртов окрашивается в оранжевый
(с о-дианизидином), синий (3, 3′ ,5, 5′-тетраметилбензидин), зеленый (2,6-
дихлорфенолиндофенол,         смесь     1,7-дигидроксинафталина     и     4-
аминоантипирина), желтый (билирубин) цвета.
      Максимальной          каталитической        активностью       обладает
альдегиддегидрогеназа (АДГ) в реакции окисления этанола, поэтому можно
определять этанол на фоне других низших алифатических спиртов. Наиболее
простые тест-системы состоят из АДГ, никотинамидадениндинуклеотида
(НАД+), хромогенного реагента, переносчика электронов (например,
1-метоксифеназинметасульфата) и ряда антиоксидантов. Все реагенты в
определенной последовательности наносят на полоски фильтровальной бумаги,
а затем высушивают. Наличие этанола в диапазоне концентраций 3-65 мМ в
биологических жидкостях определяют по появлению сине-фиолетовой окраски
на полоске, в которой в качестве хромогенного реагента нанесена
тетразолиевая соль. Иногда бумагу дополнительно пропитывают полимером,
например, влагопоглощающим полимером Water-Lock L413. Предел
обнаружения этанола составляет 17 мкМ (1· 10-3 об.%).
       В тест-системах используют также смесь двух ферментов, например,
алкогольоксидазу и пероксидазу или диафоразу. Альдегид, образующийся в
результате окисления спирта альдегиддегидрогеназой, окисляется далее под
действием АДГ, а образующийся при этом НАДН взаимодействует с
n-нитротетразолием фиолетовым, образуя окрашенный продукт. Катализатором
в этой реакции выступает диафораза.
      Этанол и метанол в плазме крови можно идентифицировать в ячейках
полистирольного планшета, добавляя по каплям в определенной
последовательности фосфатный буферный раствор (рН 7,0), растворы
алкогольоксидазы, n-фенилендиамин, спирт и 0,225 М раствор пероксида
водорода. Через 1 мин после добавления пероксида водорода сравнивают
окраску растворов в ячейках. В ячейках, содержащих этанол, появляется
розовая окраска, в ячейках, содержащих метанол, – темно-фиолетовая.
      Для тестирования алкоголя в моче можно использовать тест-полоски,
содержащие алкогольоксидазу, пероксидазу хрена и в качестве хромогенных
реагентов    –    гидрохлорид     гидразона    3-метилбензтиазолилинона    и
3-диметиламинобензойную кислоту. Пробу мочи 1-5 мл помещают в
центрифужную пробирку емкостью 15 мл и над раствором помещают тест-
полоску. Закрытую пробирку нагревают 5 мин при 65оС и наблюдают
изменение цвета.