Хроматографические методы анализа. Гиндуллина Т.М - 62 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТПУ | Томск

Составители: 

Рубрика: 

Разделению смеси аминокислот мешают следы металлов в бумаге
для хроматографии, которые вымывают раствором 8-оксихинолина или
комплексона III. Для этого из хроматографической бумаги № 1 или № 2
вырезают круглые листки диаметром 10–12 см и обрабатывают 0,1%-
ным раствором 8-оксихинолина, приготовленным на смеси н-бутанола,
ледяной уксусной кислоты и воды в соотношении по объему (8:1:1). Бу-
магу погружают на 1–2 мин в раствор 8-оксихинолина, затем подсуши-
вают, помещают в хроматографическую камеру и пропускают ПФ до
полного обесцвечивания темноокрашенных соединений 8-оксихинолина
с катионами металлов. Затем бумагу многократно промывают дистилли-
рованной водой и сушат на воздухе. Эта подготовка выполняется за-
благовременно.
Анализ смеси веществ проводят по следующей схеме: на круглый
обеззоленный фильтр в центр наносят каплю разделяемой смеси,
фильтр подсушивают и помещают в хроматографическую камеру с ПФ.
ПФ под действием капиллярных сил поднимается по «фитилю», дости-
гает стартового пятна с разделяемой смесью, вместе с ней перемещают-
ся с различной скоростью определяемые вещества.
Анализируемый раствор наносят на стартовую линию с помощью
стеклянного капилляра в объеме не более 5–10 мкл. Чем меньше пло-
щадь стартового пятна, тем менее размытой будет зона вещества после
хроматографирования. Поэтому пробу наносят в одну и ту же точку в
несколько приемов, каждый раз подсушивая пятно.
Зоны разделяемых веществ имеют вид концентрических колец, ко-
торые могут быть видимыми и невидимыми; в последнем случае хрома-
тограмму проявляют – опрыскивают раствором специфического реаген-
та, либо подвергают воздействию УФ-излучения (см. рис.2.2., предыду-
щая работа).
Скорость перемещения компонентов определяется соответствую-
щими коэффициентами распределения: чем меньше коэффициент рас-
пределения, тем быстрее вещество передвигается по сорбенту. В каче-
стве характеристики удерживания используется величина R
f
– подвиж-
ность, определяемая как отношение расстояния фронтов компонента и ПФ:
f
l
R
L
=
,
где l – расстояние, пройденное зоной компонента от старта пятна, см;
L – расстояние, пройденное подвижной фазой, см. Под фронтом
растворителя понимают видимую границу распространения
растворителя по бумаге.
При этом в качестве подвижной фазы используют смесь н-
62

Страницы