Хроматографические методы анализа. Гиндуллина Т.М - 63 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТПУ | Томск

Составители: 

Рубрика: 

бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды в объемном соотношении
(4:1:5), смесь тщательно взбалтывают и после расслоения берут верхний
слой. Проявителем служит раствор с массовой долей нингидрина 0,25%
в водонасыщенном н-бутиловом спирте. Нингидрин дает с
аминокислотами оранжево-коричневое окрашивание бумаги.
Растворы, реактивы, аппаратура.
1. Стандартный раствор α-аланина, 0,5 мг/мл
2. Стандартный раствор аспарагиновой кислоты, 0,5 мг/мл
3. Раствор нингидрина 0,25% в водонасыщенном н-бутиловом спирте
4. Подвижная фаза – н-бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды в
объемном соотношении (4:1:5)
5. Хроматографическая бумага № 1 или № 2
6. Капилляры стеклянные
7. Хроматографическая камера
Выполнение работы
1. На предварительно подготовленной хроматографической бумаге
простым карандашом намечают контуры «фитиля» длиной 40 мм и ши-
риной 4 мм (см. рис.2).
2. На центр бумаги с помощью капилляра наносят каплю раствора
разделяемой смеси. Раствор наносят в несколько приемов, чтобы впиты-
вание происходило за счет капиллярных сил бумаги. Образовавшееся
пятно осторожно обводят простым карандашом, т.е. фиксируют его по-
ложение на бумаге. Бумагу высушивают, вырезают «фитиль», как пока-
зано на схеме.
3. В хроматографическую камеру помещают кристаллизатор и
тигель с 10 мл подвижной фазы. На кристаллизатор сверху помещают
круг бумаги, следя за тем, чтобы «фитиль» был погружен в раствори-
тель, и закрывают камеру крышкой. Во время разделения не рекоменду-
ется открывать крышку камеры, перемещать камеру.
3. Когда произойдет размывание первичного пятна растворителем,
и фронт ПФ пройдет расстояние, не доходя до края бумаги, бумагу вы-
нимают, отмечают карандашом границы фронта растворителя, высуши-
вают в токе теплого воздуха и приступают к проявлению зон.
4. Для проявления зон локализации аспарагиновой кислоты и α-
аланина бумагу опрыскивают проявителем из стеклянного пульвериза-
тора. Из появляющихся двух кольцевых окрашенных зон локализации
первая принадлежит аспарагиновой кислоте, вторая – α-аланину.
5. Рассчитывают для обеих аминокислот значения R
f
, считая нача-
лом их пути наружную границу первоначального пятна, отмеченную ка-
рандашом, а концом пути – наружные границы появившихся после про-
явления кольцевых зон локализации. Расстояние же, пройденное
63

Страницы