Цитогенетический мониторинг. Калаев В.Н - 49 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВГУ | Воронеж

Составители: 

Рубрика: 

49
H
2
N NH
2
+ H
2
O
2
NH NH + 2H
2
O
Последний конденсируется со второй молекулой бенздина с образо -
ванием окрашенного соединения (бензидинового синего).
Оборудование и реактивы: СФ -46; весы; секундомер; фильтры бу -
мажные ; фарфоровые ступки; кварцевый песок или толченое стекло; стек-
лянные палочки; воронки; колбы; пипетки на 1, 2 и 10 мл. Раствор бензи -
дина (в мерную колбу на 100 мл вливают 60 – 70 мл дистиллированной во-
ды, прибавляют 1,15 мл ледяной уксусной кислоты и 92 мг бензидина ос-
новного; раствор подогревают до 50 – 60
о
С на водяной бане при постоян -
ном помешивании; через 10 –15 мин после полного растворения бензидина
добавляют 2,72 г ацетата натрия, колбу охлаждают и доливают до метки;
раствор может храниться в темном месте 2 недели); 3 %-ный раствор пе-
роксида водорода; 0,2 М ацетатный буфер, рН 4,7.
Материалы: листья традесканции.
Практическая часть: 0,5 – 1 г растительной ткани растирают с квар-
цевым песком или толченым стеклом и 3 мл ацетатного буфера , рН 4,7; за -
тем добавляют еще 7 мл буфера и фильтруют. В две кюветы шириной 1 см
наливают по 2 мл раствора бензидина и 1 мл ферментной вытяжки. Смесь
осторожно перемешивают и ставят в гнезда СФ -46. Измерения проводят
при длине волны 520 нм. В контрольную кювету вливают 2 мл воды, в
опытную 2 мл Н
2
О
2
. Регистрируюи значения оптической плотности в
опытной кювете в момент добавления Н
2
О
2
и продолжают измерения в
циклическом режиме до тех пор, пока значение оптической плотности не
перестанет изменяться. Активность фермента рассчитывают по формуле:
А=(D
0
- D)/(m × t),
где А – активность фермента, ед /мг · с;
D
0
– оптическая плотность образца в начальный момент времени;
D – оптическая плотность образца в конечный момент времени;
m – масса навески, мг;
t – время измерения, с.
2. Используя статистику Стьюдента, сравнить данные , полученные
при изучении пероксидазной активности в листьях традесканции Zebrina
pendula Schnizl., подвергнутой радоновому облучению и в контрольных
образцах.
3. Сделать выводы о влиянии радоновой радиации на активность пе-
роксидазы у изучаемого растительного тест -объекта. 
                                     49

      H2 N             NH2 + H2 O2        NH           NH + 2H2 O


      Последний конденсируется со второй молекулой бенздина с образо-
ванием окрашенного соединения (бензидинового синего).
      Оборудование и реактивы: СФ-46; весы; секундомер; фильтры бу-
мажные; фарфоровые ступки; кварцевый песок или толченое стекло; стек-
лянные палочки; воронки; колбы; пипетки на 1, 2 и 10 мл. Раствор бензи-
дина (в мерную колбу на 100 мл вливают 60 – 70 мл дистиллированной во-
ды, прибавляют 1,15 мл ледяной уксусной кислоты и 92 мг бензидина ос-
новного; раствор подогревают до 50 – 60 оС на водяной бане при постоян-
ном помешивании; через 10 –15 мин после полного растворения бензидина
добавляют 2,72 г ацетата натрия, колбу охлаждают и доливают до метки;
раствор может храниться в темном месте 2 недели); 3 %-ный раствор пе-
роксида водорода; 0,2 М ацетатный буфер, рН 4,7.
      Материалы: листья традесканции.
      Практическая часть: 0,5 – 1 г растительной ткани растирают с квар-
цевым песком или толченым стеклом и 3 мл ацетатного буфера, рН 4,7; за-
тем добавляют еще 7 мл буфера и фильтруют. В две кюветы шириной 1 см
наливают по 2 мл раствора бензидина и 1 мл ферментной вытяжки. Смесь
осторожно перемешивают и ставят в гнезда СФ-46. Измерения проводят
при длине волны 520 нм. В контрольную кювету вливают 2 мл воды, в
опытную 2 мл Н2 О2. Регистрируюи значения оптической плотности в
опытной кювете в момент добавления Н2 О2 и продолжают измерения в
циклическом режиме до тех пор, пока значение оптической плотности не
перестанет изменяться. Активность фермента рассчитывают по формуле:
                              А=(D0 - D)/(m × t),
где А – активность фермента, ед/мг · с;
      D0 – оптическая плотность образца в начальный момент времени;
      D – оптическая плотность образца в конечный момент времени;
      m – масса навески, мг;
      t – время измерения, с.
      2. Используя статистику Стьюдента, сравнить данные, полученные
при изучении пероксидазной активности в листьях традесканции Zebrina
pendula Schnizl., подвергнутой радоновому облучению и в контрольных
образцах.
      3. Сделать выводы о влиянии радоновой радиации на активность пе-
роксидазы у изучаемого растительного тест-объекта.

Страницы