Биотехнология. Коростелева Н.И - 30 стр.

     4. ÌÅÒÎÄÛ ÃÅÍÅÒÈ×ÅÑÊÎÉ ÈÍÆÅÍÅÐÈÈ

    В новой биотехнологии чаще используются вирусы и бакте-
рии, растения и животные и их клетки, полученные (или улуч-
шенные) с использованием методов генетической инженерии.
    Последовательность генно-инженерных процессов следую-
щая:
    1. Получение генов.
    2. Введение гена в вектор и их клонирование.
    3. Методы трансформации животных и растительных кле-
ток.
    4. Скрининг – отбор бактерий или клеток, в которые встро-
ился ген.
    5. Экспрессия (функционирование) генов у реципиента.
    6. Вылавливание генных продуктов из «грязной» смеси.

               4.1. Ìåòîäû ïîëó÷åíèÿ ãåíîâ

    1. Химический синтез. Расшифровав последовательность ами-
нокислот в белке и используя генетический код, определяют после-
довательность нуклеотидов ДНК на участке гена и производят его
синтез из нуклеотидов при помощи фермента полимераза-1. Таким
путем в 1969 г. Корана впервые синтезировал участок молекулы
ДНК, кодирующий аланиновую т-РНК, а в 1977 г. Бойер синтези-
ровал ген соматостатина человека, а затем и ген инсулина.
    В 1977 г. В. Гилбертом, а также Ф. Сэнгером был предложен
метод секвенирования, т.е. распознавания последовательности
нуклеотидов в фрагментах нуклеиновых кислот. Метод химиче-
ского синтеза генов оказался трудоемким и малоэффективным.
Затем появились быстрые и простые методы синтеза сравни-
тельно длинных олигонуклеотидов с определенной, заранее за-
данной, последовательностью нуклеотидов. Теперь довольно
легко можно синтезировать последовательность до 100 нуклео-
тидов. Автоматизация этих процессов еще более облегчает и
ускоряет синтез.
    2. Рестрикционный метод, или получение генов с помо-
щью специфических эндонуклеаз – рестриктаз. Эти ферменты

                              30