Биотехнология. Коростелева Н.И - 31 стр.

открыты в 1953 г. у бактерий. С помощью рестриктаз расщеп-
ляют ДНК бактерий другого штамма или клетки-хозяина. К на-
стоящему времени из разных микроорганизмов выделено более
тысячи различных рестриктаз; в генетической инженерии ис-
пользуется около 200.
    Рестриктазы гидролизируют ДНК строго по определенным
специфическим последовательностям, называемым сайтами
рестрикции. Каждая из рестриктаз узнает свой сайт рестрикции
и разрезает ДНК либо внутри сайта, либо в непосредственной
близости от него. Обозначение растриктаз складывается из на-
чальных букв латинского названия вида бактерии, из которой
выделен фермент, и дополнительного обозначения, т.к. из бак-
терий одного вида может быть выделено несколько различных
рестриктаз: Escherichia coli – Eco R1, Eco RV; Thermus aguaticus
– Tag 1.
    Из нескольких типов рестриктаз в генной инженерии часто
используются рестриктазы двух типов, которые узнают опреде-
ленную последовательность ДНК и гидролизуют ее внутри по-
следовательности сайта рестрикции. Сайты их рестрикции пред-
ставлены симметричными при повороте на 1800 последователь-
ностям-полиндромами:
    5' ГААТТЦ 3'
    3' ЦТТААГ5' сайт рестрикции рестриктазы Eco R1
    5' ТАГА 3'
    3' АТЦГ 5' сайт рестрикции рестриктазы Tag 1.
    Если рестриктазы II вносят разрывы по оси симметрии узна-
ваемой последовательности, то они образуют «тупые» концы:
           ТА ↓ ГА 3'                         5' ГТТ ↓ ААЦ 3'
     Таg АТ ↑ ЦТ 5'              Hinc 1        3' ЦАА ↑ ТТГ 5'
    Если же разрывы образуются со сдвигом и образованием
«ступенек», то образуются «липкие» концы:
             5' Г ↓ ААТТЦ 3'                 5' Ц ↓ ЦГГ 3'
     Eco R   3' ЦТТАА ↑ Г          Hpa II    3' ГГЦ ↑ Ц 5'
    Фрагменты ДНК, имеющие одинаковые «липкие» концы,
могут соединяться друг с другом с помощью ДНК-лигазы, при
этом сайт рестрикции восстанавливается. Фрагменты с «липки-
ми» концами наиболее удобны для создания рекомбинантных
ДНК.

                              31