Физико-химические основы биолюминесцентного анализа - 43 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

85
ГЛАВА 3. БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ БИОТЕСТЫ ДЛЯ
ЭКОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА
3.1. СВЕТЯЩИЕСЯ БАКТЕРИИ В ЭКОЛОГИЧЕСКОМ
МОНИТОРИНГЕ
Рассмотрим существующие в настоящее время биотесты с
использованием светящихся бактерий. Биотесты с использова-
нием живых бактерий отличаются от современных биотестов,
использующих инфузории, дафнии, водоросли, рыб, лишь тем,
что в качестве параметра жизнедеятельности измеряется био-
люминесценция.
Биотесты на светящихся бактериях дают количественную
меру токсичности и часто
превосходят известные биотесты по
быстродействию, точности, чувствительности и простоте, по-
зволяют контролировать одновременно значительное число
токсикантов.
В табл. 4 представлены все известные к настоящему вре-
мени биотесты на светящихся бактериях. Разработка биолюми-
несцентных биотестов обычно идет в три этапа: подготовка
тестовой культуры бактерий; собственно измерение свечения
бактерий в присутствии или при
отсутствии анализируемых
веществ; установление связи между параметрами свечения и
количественными характеристиками токсичности среды.
Каждый из этапов имеет свои особенности, связанные с
тем, какая культура бактерий используется для анализа. По-
этому все известные к настоящему времени биотесты удобно
классифицировать по способу приготовления тестовой культу-
ры (периодической или непериодической) или реагентов на ос
-
нове бактерий.
Периодическая культура может быть выращена на твердой
либо в жидкой среде в виде суспензии. На примере аминазина
[2,3] было показано, как выполняют измерения в биотестах с
использованием суспензии бактерий. Из тестовой культуры от-
бирают пробы и в кювете люминометра регистрируют свечение
86
бактерий при отсутствии анализируемого вещества - Iо. Далее
строят кривую разведения для анализа, добавляя в кювету 0,2
мл раствора аминазина разных концентраций, и регистрируют
тушение люминесценции бактерий (I). Ингибирующий эффект
определяется по величине (I/Iо),%. С увеличением концентра-
ции аминазина величина этого параметра растет. По кривой
разведения можно найти концентрацию аминазина, угнетаю-
щую свечение на 50%.
Таблица 4
Бактериальные биолюминесцентные биотесты
Биотест Действующие вещества
Загрязнение пищевых про-
дуктов микотоксинами (7,53-
31,79 мкг/мл)
Рубратоксин В, зеараленон, пеницил-
лин, патулин, цитринин, охратоксин
А, РР-токсин, афлатоксин В1
Присутствие в среде анти-
биотиков (0,2 мкг/мл)
Тетрациклин, хлорамфеникол, стреп-
томицин, неомицин, гентамицин, ка-
намицин
Токсичность сточных вод и
водной среды
Ароматические углеводороды, дыха-
тельные яды, фенольные соединения
и продукты их деструкции, сульфат-
ный лигнин, окрашенные фракции
стоков, фенолоксидазы, детергенты,
пестициды, тяжелые металлы, ко-
бальт, отходы производства стабили-
заторов
Токсичность в воздушной
среде (компоненты ракетно-
го топлива)
Диметилгидразин, альдегиды, спирты,
ацетон, HCN, SO
2
, H
2
S, Cl
2
, продукты
облучения смеси N0
2
и цис-2-бутена
Загрязнение среды гербици-
дами
Mонурон, диурон, нефурон, атразин
Определение бактерицидной
активности в сыворотке че-
ловека
Иммуноглобулины, комплементы
Модельное изучение влияния
химических и физических
факторов
Температура, давление, лекарствен-
ные препараты, анестетики (галотан),
глицерин, сахароза
Тест на мутагенность

Страницы