Физико-химические основы биолюминесцентного анализа - 44 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

87
Продукты окисления кероге-
на сланцев
Высокомолекулярные кислоты
Токсичность для рыб Органические вещества
Чувствительность светящихся бактерий к различным веще-
ствам зависит от многих факторов, и, прежде всего, от штамма
и условий культивирования бактерий (состава питательной
среды, рH среды, фазы роста бактерий и т.д.). Было показано,
что наибольшая чувствительность к аминазину (0,25 мМ) дос-
тигается при использовании для анализа P.phosphoreum в конце
экспоненциальной фазы роста и
P.fisheri в начале экспоненци-
альной и в стационарной фазах роста на полусинтетической
среде с пептоном, глицерином и концентрацией NаСI – 50 г/л,
рH 8,0.
Описанные в литературе методы тестирования ксенобио-
тиков отличаются лишь небольшими модификациями. Напри-
мер, в значительных пределах может меняться количество
клеток, взятых для анализа, или объем анализируемой про-
бы. Однако
в силу относительности измерений такие модифи-
кации не влияют существенно на последовательность
проводимых операций.
Рассмотрим примеры известных биотестов (см. табл.4).
Клеточная суспензия используется в биотестах для оценки ток-
сичности сточных вод целлюлозной промышленности в ре-
зультате загрязнения их фенольными соединениями и
продуктами их распада, сульфатным лигнитом и окрашенным
веществом, остающимся в
сточных водах после биологической
очистки.
Использование твердых сред в подобных методах позволя-
ет многократно использовать одну и ту же культуру клеток в
высокочувствительных детекторах для непрерывного контроля
загрязненности воздуха в шахтах, горных выработках и штоль-
нях. При этом компоненты среды тушат свечение бактерий, по-
сле чего через 10-15 с свечение восстанавливается
до
исходного уровня, и можно производить новые измерения.
88
Анализ загрязнения воздуха газообразными отходами про-
изводства, получающимися при облучении окислов азота и
цис-2-бутена, проводят сравнением свечения бактерий, рaсту-
щих на агаре, при пропускании над ними анализируемой газо-
вой смеси и чистого воздуха.
Попытка осуществить избирательный анализ газообразных
веществ предпринята
в приборе, созданном в США. Для этой
цели в конструкции прибора предусмотрена логическая схема,
сопоставляющая ответы от нескольких фоторегистрирующих
ячеек, каждая из которых должна быть чувствительна к огра-
ниченному кругу веществ. Сигнал генерируется только в слу-
чае, если суммарный ответ указывает на анализируемое
вещество. Однако достижению предполагаемой избирательно-
сти прибора
препятствует невозможность выбора штамма све-
тящихся бактерий, чувствительных к ограниченному кругу
веществ, а значит, и создание избирательных фоторегистри-
рующих ячеек.
В целом все тесты с использованием периодической куль-
туры сходны между собой - сравнивается свечение бактерий в
контроле и в присутствии анализируемых веществ или их сме-
сей. Относительность измерений важна при работе
с ингибито-
рами, нерастворимыми или мало растворимыми в воде. В этом
случае используются их растворы в этаноле или других орга-
нических растворителях (хлороформ, диметилсульфоксид и
т.д.), а контролем служит интенсивность свечения в присутст-
вии растворителя.
Остановимся на некоторых недостатках такого биотести-
рования. Прежде всего в периодической культуре в результате
роста бактерий меняются их характеристики, например удель-
ное свечение, что сказывается на чувствительности и на точно-
сти измерений. Использование безразмерной величины -
(I/Iо)⋅100% не решает этой проблемы. К тому же важно под-
держание тестовой культуры бактерий, способной сохранять
постоянной интенсивность свечения в течение хотя бы двух-
трех часов. Удельная интенсивность
свечения культуры бакте-

Страницы