Физико-химические основы биолюминесцентного анализа. Кудряшева Н.С - 70 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

139
Раствор соли вводить в реакционную смесь перед FMN.
Состав реакционной смеси:
1. 50 мкл 0.0025%-ного водного раствора альдегида;
2. 5 мкл КРАБа;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;
4. 200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 0-50 мкл р-ра соли (Mn
2+
, Cu
2+
или Pb
2+
). Нулевая концен-
трация соли соответствует контрольному замеру;
6.
50 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Перед и после получения концентрационной зависимости
соли делать контрольные измерения интенсивности свечения I
0
(2-3 сходных результата).
Добавлять различные объемы раствора соли Mn
2+
(2 -
50мкл) в биолюминесцентную систему (4-6 объемов по 2-3 из-
мерения) и регистрировать интенсивность сигнала I. Для кон-
трольных измерений и измерений с каждым объемом посчитать
среднее и среднеквадратичное отклонение. Представить зави-
симость интенсивности биолюминесценции от концентрации
раствора соли в координатах I/I
0
= f(C) и ln(I/I
0
) = f(C).
По начальному прямолинейному участку полученной кри-
вой посчитать константу ингибирования раствора Mn
2+
(К) по
формуле
ln(I/I
0
) = -KC.
Если не удается зафиксировать начальный этап ингибиро-
вания или активации, необходимо разбавить исходный раствор
соли.
Повторить эксперимент и расчеты, используя вместо рас-
твора Mn
2+
растворы Cu
2+
и Pb
2+
. Сравнить полученные вели-
чины К. Объяснить различия действия солей металлов.
140
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА N8 (2 ЧАСА).
НЕАДДИТИВНОСТЬ ДЕЙСТВИЯ СОЛЕЙ МЕТАЛЛОВ НА
БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИЮ
Очень часто действие соединений на химические и биохи-
мические системы носит неаддитивный характер, т.е. эффект
суммы соединений не равен сумме эффектов этих соединений,
а больше или меньше него.
Цель работы состоит в демонстрации неаддитивности воз-
действия солей металлов на биолюминесцентную систему.
Используем те же растворы солей металлов и ту же био-
люминесцентную систему, что и в работе N7.
Ход работы
Состав реакционной смеси тот же, что и в работе N7.
Сначала выберем объемы и концентрации растворов солей
металлов, изменяюшие интенсивность биолюминесцентного
сигнала на 50%. Для этого необходимо добавить к раствору
биолюминесцентной системы растворы исследуемых солей,
уменьшая объем добавляемой соли от 50 до 2 мкл. (В случае
недостижимости 50%-ного ингибирования можно разбавить
исходные растворы в
10 раз до 10
-2
М.)
Затем смешаем попарно равные объемы выбранных рас-
творов. Получим 3 сложных раствора: 1) (Mn
2+
+ Cu
2+
); 2)
(Mn
2+
+ Pb
2+
); 3) ( Cu
2+
+ Pb
2+
). Изучим эффекты этих растворов
на биолюминесценцию.
Провести контрольные измерения биолюминесцентного
сигнала. Посчитать ошибку и среднее.
Добавить эти же объемы трех растворов в реакционную
смесь. Зарегистрировать изменение интенсивности биолюми-
несценции (I/I
0
). Сделать выводы об аддитивности действия
данных соединений. Постараться объяснить причины неадди-
тивности эффектов.

Страницы