ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
135
Таблица 8
Стандартные окислительно-восстановительные
Потенциалалы (Е
0
1/2
) хинонов и FMN
Соединение Е
0
1/2
, В
Бензохинон 0.712
Толухинон 0.656
Тимохинон 0.650
Нафтохинон 0.484
Бензантрахинон 0.230
FMN 0.206
Антрахинон-β- моносульфокислота
0.156
Антрахинон 0.150
Из этой таблицы видно, что в условиях, приближенных к
стандартным, только два хинона не конкурируют с FMN в про-
цессе восстановления - антрахинон-β-моно-сульфокислота и
антрахинон.
Поэтому в реакционной смеси в присутствии хинонов с
большей величиной Е
0
1/2
, чем у FMN, должно в первую очередь
происходить восстановление хинона. После того, как концен-
трация хинона в реакционной смеси будет уменьшена до кри-
тической, должно начаться восстановление FMN. Эти процессы
приводят к наличию индукционного периода биолюминесцен-
ции Т - отсутствия свечения в начальный период времени - и
увеличению времени выхода на максимум биолюминесценции
t (см
.рис.21). Причем величины Т и t зависят от концентрации
хинона.
Таким образом, биферментная система специфична к груп-
пе хинонов с высоким окислительно-восстанови-тельным по-
тенциалом.
Цель работы
- получить зависимость Т и t от концентра-
ции хинона.
136
Ход работы
Используется биферментная система, работа с которой ос-
воена студентами в лабораторных работах N2,3,4.
Приготовить водный 10
-4
М раствор и водно-спиртовый 0.5
10
-4
М раствор антрахинона по методике, описаной в работе 5.
Используемые растворы биолюминесцентной системы те
же, что и в работе N2.
Раствор хинона вводить в реакционную смесь перед FMN.
Состав реакционной смеси :
1. 50 мкл 0.0025%-ного водного раствора альдегида;
2. 5 мкл КРАБа;
3. 200 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН 7.0;
4. 200 мкл 4 10
-4
М раствора NADH;
5. 0-50 мкл р-ра хинона (бензохинона или антрахинона). Нуле-
вая концентрация хинона соответствует контрольному замеру;
6. 50 мкл 5,4 10
-4
M раствора FMN.
Перед получением концентрационной зависимости и после
него делать контрольные измерения интенсивности свечения I
0
(2-3 сходных результата).
Добавлять различные объемы раствора бензохинона (2 – 50
мкл) в биолюминесцентную систему (4-6 объемов по 2-3 заме-
ра) и регистрировать интенсивность сигнала (I), индукционный
период Т и задержку выхода на максимум свечения t. Для кон-
трольных измерений и измерений с каждым объемом посчитать
среднее и среднеквадратичное отклонение. Представить зави-
симость интенсивности биолюминесценции от концентрации
бензохинона
в координатах I/I
0
= f(C) и ln(I/I
0
) = f(C) и зависи-
мости Т = f(C) и t = f(C).
По начальному прямолинейному участку полученной кри-
вой посчитать константу ингибирования бензохинона (К) по
формуле ln(I/I
0
) = -KC.
Повторить эксперимент и расчеты, используя вместо рас-
твора бензохинона раствор антрахинона. Сравнить полученные
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 66
- 67
- 68
- 69
- 70
- …
- следующая ›
- последняя »