Цитологическое изучение растительных и животных клеток. Машкина О.С - 47 стр.

UptoLike

47
свой собственный псевдоцвет. Например, окраска хромосомы более чем
одним цветом свидетельствует о наличии транслокации (обмене между не-
гомологичными участками хромосом ).
В настоящее время в ряде диагностических центров некоторые вари-
анты многоцветной FISH используются в качестве рутинных методов при
анализе хромосомных перестроек у человека.
Материалы и оборудование. Микрофотографии (или ксерокопии)
кариотипов сосны обыкновенной , пшеницы, эгилопса, человека. Милли-
метровая бумага, линейка, ножницы, клей, карандаш .
Ход работы. Задание 1. Ознакомиться с методами изучения и иден-
тификации хромосом: морфометрическим с использованием сплошного
окрашивания хромосом, методами дифференциального окрашивания, ме-
тодом цитологической гибридизации in situ: ISH- и FISH- гибридизация,
хромосомным пэйнтингом . Рассмотреть возможности изучения кариотипа
при использовании данных методов, их достоинства и недостатки . Резуль-
таты сравнительного анализа занести в таблицу:
Методы изучения и иден-
тификации хромосом
Суть и краткая ха-
рактеристика метода
Возможности метода,
области применения
Задание 2. Ознакомиться с принципами составления кариограммы и
идиограммы. Используя микрофотографии метафазных пластинок сосны
обыкновенной со сплошным окрашиванием хромосом определить основ-
ные параметры каждой хромосомы. Составить идиограмму изучаемого ви-
да. Для этого с микрофотографии вырезать каждую хромосому. По визу-
альному наблюдению подбор гомологичных хромосом затруднителен, по-
этому сначала промеряют каждую хромосому, а затем уже подбирают ей
парную . Определить : абсолютную длину каждой хромосомы и каждого ее
плеча в мм, а также их истинный размер в мкм . Вычислить основные пока-
затели: относительную длину каждой хромосомы, плечевой индекс , цен-
тромерный индекс . Результаты проведенных исследований занести в таб -
лицу:
Длина, мм (или мкм )
хромо
сомы
абсо-
лютная
Длинно-
го плеча
Коротко-
го плеча
Относи-
тельная
длина, %
Плечевой
индекс
Центро-
мерный ин-
декс , %
Подобрать пары гомологичных хромосом , наклеить их на бумагу.
Составить идиограмму. Для этого на миллиметровой бумаге нарисовать
одну из пар хромосом. Располагать центромеры по одной прямой , корот-
кое плечо вверху, длинное внизу.
Задание 3. Составить кариограмму с использованием микрофото-
графий дифференциально окрашенных хромосом эгилопса. Для этого вы-
                                        47
с вой с обс тве нный пс е вдоцве т. Н априме р, окрас ка хромос омы бол е е че м
одним цве том с виде те л ь с твуе т о нал ичии транс л окации (обме не ме жду не -
гомол огичными учас тками хромос ом).
       В нас тоящ е е вре мяв ряде диагнос тиче с ких це нтров не которые вари-
анты многоцве тной FISH ис пол ь зую тс я в каче с тве рутинных ме тодов при
анал изе хромос омных пе ре с трое к у че л ове ка.

      М ат ери алы и оборудован и е. М икрофотографии (ил и кс е рокопии)
кариотипов с ос ны обыкнове нной , пш е ницы, эгил опс а, че л ове ка. М ил л и-
ме троваябумага, л ине й ка, ножницы, кл е й , карандаш .
      Х о д ра бо т ы. Задан ие1. О знакомить с яс ме тодами изуче нияи иде н-
тификации хромос ом: морфоме триче с ким с ис пол ь зование м с пл ош ного
окраш ивания хромос ом, ме тодами диффе ре нциал ь ного окраш ивания, ме -
тодом цитол огиче с кой гибридизации in situ: ISH- и FISH- гибридизация,
хромос омным пэй нтингом. Р ас с мотре ть возможнос ти изуче ния кариотипа
при ис пол ь зовании данных ме тодов, их дос тоинс тваи не дос татки. Р е зул ь -
таты с равните л ь ного анал изазане с ти в табл ицу:
М е тоды изуче нияи иде н-      Суть и краткаяха-       В озможнос ти ме тода,
   тификации хромос ом         ракте рис тикаме тода обл ас ти приме не ния


        Задан ие2. О знакомить с я с принципами с ос тавл е ния кариограммы и
идиограммы. И с пол ь зуя микрофотографии ме тафазных пл ас тинок с ос ны
обыкнове нной с о с пл ош ным окраш ивание м хромос ом опре де л ить ос нов-
ные параме тры каждой хромос омы. Сос тавить идиограмму изучае мого ви-
да. Д л я этого с микрофотографии выре зать каждую хромос ому. П о визу-
ал ь ному набл ю де нию подбор гомол огичных хромос ом затрудните л е н, по-
этому с начал а проме ряю т каждую хромос ому, а зате м уже подбираю т е й
парную . О пре де л ить : абс ол ю тную дл ину каждой хромос омы и каждого е е
пл е чав мм, атакже их ис тинный разме р в мкм. В ычис л ить ос новные пока-
зате л и: относ ите л ь ную дл ину каждой хромос омы, пл е че вой инде кс , це н-
троме рный индекс . Р е зул ь таты прове де нных ис с л е дований зане с ти в таб-
л ицу:
   №          Д л ина, мм (ил и мкм)         О тнос и- П л е че вой    Ц е нтро-
хромо абс о- Д л инно- Коротко- те л ь ная                 инде кс  ме рный ин-
 с омы л ю тная го пл е ча го пл е ча дл ина, %                         де кс , %



      П одобрать пары гомол огичных хромос ом, накл е ить их на бумагу.
Сос тавить идиограмму. Д л я этого на мил л име тровой бумаге нарис овать
одну из пар хромос ом. Р ас пол агать це нтроме ры по одной прямой , корот-
кое пл е чо – вве рху, дл инное внизу.
      Задан ие 3. Сос тавить кариограмму с ис пол ь зование м микрофото-
графий диффе ре нциал ь но окраш е нных хромос ом эгил опс а. Д л я этого вы-