Торф: химический анализ и основы комплексной переработки. Сергеева М.А - 64 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ТГПУ | Томск

Составители: 

Рубрика: 

64
Приготовление реактивов:
1. 0,5 %-ный раствор перекиси водорода. 1 мл 30 %-ной перекиси водорода разбавляют до 60 мл
дистиллированной водой.
2. 1 %-ный раствор гидрохинона. Навеску гидрохинона массой 1 г растворяют в 100 мл дистил-
лированной воды.
3. Фосфатный буфер с рН 5,8. К 60,45 мл 0,2 М раствора Na
2
HPO
4
*12H
2
O приливают 39,55 мл
0,1 М раствора лимонной кислоты. Буфер желательно готовить в день определения.
4. 0,2 М раствор Na
2
HPO
4
*
12H
2
O. Навеску Na
2
HPO
4
*12H
2
O массой 7,16276 г растворяют в 100 мл
дистиллированной воды.
5. 0,1 М раствор лимонной кислоты. Навеску лимонной кислоты массой 1,9213 г растворяют
в 100 мл дистиллированной воды.
6. Стандартный раствор хинона. Навеску хинона массой 200 мг помещают в мерную колбу на 100
мл, растворяют в 20 мл этилового спирта и доводят дистиллированной водой до метки. Титр
раствора: 2 мг/мл.
Ход работы:
1. Построение градуировочного графика. Для построения графика готовят 11 рабочих рас-
творов в соответствии с таблицей 21 Необходимый объем стандартного раствора берут в мерные
колбы на 25 мл и доводят водой до метки. Через 20–30 мин растворы колориметрируют на фотоко-
лориметре, относительно дистиллированной воды. Оптическую плотность заносят в таблицу
и строят градуировочный график зависимости оптической плотности от концентрации
1,4n-бензохинона.
Таблица 21
Данные для построения градуировочного графика
Показатель
Номера рабочих растворов
1234567891011
Объем стандартного раствора, мл 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Концентрация хинона, мг/мл 0,08 0,16 0,24 0,32 0,40 0,48 0,56 0,64 0,72 0,80 0,88
Оптическая плотность
2. Определение активности ферментов. Определение активности полифенолоксидазы и пе-
роксидазы проводится параллельно в трех повторностях, поэтому для анализа берут шесть кониче-
ских колб на 50 мл с притертыми пробками. Три колбы для определения пероксидазной активности,
три – для полифенолоксидазной.
В каждую коническую колбу на 50 мл помещают 0,2–0,3 г сырого грунта, колбы расставляют
в два ряда.
1-й ряд (полифенолоксидазная активность): во все три колбы к навескам грунта приливают
1 мл фосфатного буфера (рН=5,8) и 10 мл 1 %-ного раствора гидрохинона.
2-й ряд (пероксидазная активность): во все три колбы к навескам грунта приливают 1 мл
фосфатного буфера (рН=5,8), 10 мл 1 %-ного раствора гидрохинона и 1 мл 0,5 %-ного раствора пере-
киси водорода.
Параллельно с приготовлением рабочих образцов для каждого фермента готовят контрольные
образцы (по две колбы на каждый фермент).
Контрольные образцы для полифенолоксидазной активности:
1. В колбу на 50 мл переносят навеску грунта массой 0,1 г, добавляют 1 мл фосфатного буфера
(рН=5,8) и 10 мл дистиллированной воды.
2. В колбу на 50 мл наливают 1 мл фосфатного буфера (рН=5,8) и 10 мл 1 %-ного раствора гидро-
хинона.
Контрольные образцы для пероксидазной активности:
1. В колбу на 50 мл переносят навеску грунта массой 0,1 г, добавляют 1 мл фосфатного буфера
(рН=5,8) и 10 мл дистиллированной воды.
2. В колбу на 50 мл наливают 1 мл фосфатного буфера (рН=5,8), 10 мл 1 %-ного раствора гидро-
хинона и 1 мл 0,5 %-ного раствора перекиси водорода.
Содержимое колб встряхивают, ставят в термостат на 35 мин при температуре 30 ºС. После
инкубации во все колбы добавляют по 10 мл этилового спирта, перемешивают и отфильтровывают
а в это табл
- все
нормаль-
но????

Страницы