Методы определения редокс-статуса культивируемых клеток растений. Сибгатуллина Г.В - 57 стр.

                  5.3. Определение жизнеспособности клеток
        Жизнеспособность      каллусных        культур   определялась     по
модифицированному методу Кастро-Кончи с соавторами и Бейкера и Мока
(Castro-Concha et al., 2006; Baker, Mock, 1994). Краситель Эванса синий не
способен проникать в живые клетки, т.е. он является надёжным красителем для
определения мёртвых клеток. Метод основан на cпектрофотометрическом
определении жизнеспособности клеточной культуры по степени удержания
красителя мёртвыми клетками.
                           Необходимые реактивы:
1) 0,025% водный раствор Эванса синего (12,5 мг растворить в 50 мл
деионизированной воды).
2) 1% раствор додецилсульфата натрия (ДСН) на 50% этаноле (500 мг ДСН
растворить в 50 мл 50% этанола).
                                   Ход работы
        К 150 мг каллусной ткани добавить 0,5 мл 0,025% раствора Эванса
синего. Образцы инкубировать 15 мин при комнатной температуре. Затем
отмыть образцы дистиллированной водой от избыточного и несвязанного
красителя до прозрачного раствора.
        Для вымывания связанного мёртвыми клетками красителя к отмытым
клеткам добавить 1 мл 1% раствора ДСН, выдержать на водяной бане при 60 °С
в течение 30 мин.
        Центрифугировать 10 мин при 9 000 g. Объём супернатанта довести до
1 мл.
        Измерить оптическую плотность образца при длине волны 600 нм
относительно 1% раствора ДСН.
        Каждой пробе должен соответствовать контроль сравнения, т.е. образец,
состоящий на 100% из мёртвых клеток. Для получения контроля сравнения
каллусную ткань выдержать в микроволновой печи при мощности 900 Вт в
течение 3-5 мин. Далее провести процедуру, как описано выше.



                                          57