Спектрофлуорометрический анализ. - 10 стр.

плотностей. Рассмотрим кювету 1*1см, которую освещают по центру, а
наблюдение ведут под прямым углом (рис.5а). Предположим далее, сто
оптическая плотность при длине волны возбуждения равна 0,1.
                                                          I0
    Из определения оптической плотности D = lg               следует, что интенсивность
                                                          I
света в центре кюветы I равна 0.88I 0 .
                                                   I0
                                          D = lg      ,
                                                   I1
I 0 - интенсивность света падающего на кювету. Поскольку наблюдаемая
интенсивность флуоресценции пропорциональна интенсивности падающего
света, наблюдаемый выход будет примерно на 10% меньше, чем наблюдаемый
для бесконечно разбавленного расвора. Этот эффект называется эффектом
внутреннего фильтра. Такие эффекты могут уменьшить либо интенсивность
возбуждения в точке наблюдения, либо наблюдаемую флуоресценцию из-за
того, что часть ее поглощается. Относительный вклад каждого из процессов
зависит от оптических плотностей образца на длинах волн возбуждения и
испускания.
При фронтальном освещении интенсивность флуоресценции не зависит от
концентрации, и оптическая плотность может достигать больших значений- 20
и более.
Однако не существует простых и надежных методов точного опрееления
величин концентрационных эффектов и введения поправок на них.

    В работе используется спектрофлуориметр MPF-3 фирмы Хитачи. Его
основные характеристики.
    Спектральный диапазон: монохроматор возбуждения 200-700нм,
монохроматор излучения 220-800нм. Спектральное разрешение от 1 до 40нм
плавно регулируется изменением ширины щелей монохроматоров. Скорости
развертки спектра 12,5, 25, 50, 100, 150, 300 нм/мин. Источник возбуждения-
ксеноновая дуговая лампа.
    В приборе используется 90 градусная схема регистрации флуоресценции.

       РАСПОЛОЖЕНИЕ И НАЗНАЧЕНИЕ ОРГАНОВ УПРАВЛЕНИЯ

    Прибор состоит из следующих блоков: спектрофлуориметр, усилитель,
самописец, блок питания, деозонатор с трансформатором. Расположение
блоков и основных органов управления показано на рис. 6.

Блок спектрофлуориметра.
1. Emission slit- ширина щели монохроматора флуоресценции в пересчете на
    спектральное разрешение.
2. Emission wavelength- ручка развертки монохроматора флуоресценции.
3. Wave drive- включение развертки.
4. Sean speed- скорость развертки

                                          10