Спектрофлуорометрический анализ. - 9 стр.

                         F0
Видно, что зависимость      от [C] идентична зависимости, получаемой для
                         F
динамического тушения, за исключением того, что константа скорости тушения
здесь заменяется константой ассоциации.
    Измерение времени затухания флуоресценции наиболее четкий метод для
различения статического и динамического тушения.
    Можно также изучать зависимость тушения от вязкости и температуры и
проводить тщательный анализ спектра поглощения флуорофора.
    Изучение тушения флуоресценции широко используется в био-химических
исследованиях.


         ТЕХНИКА ИЗМЕРЕНИЯ СПЕКТРОВ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

    Правильный результата флуоресцентного анализа может быть получен
лишь при учете многих факторов, сопутствующих эксперименту. Отметим
основные.
    1.      Для получения истинных спектров флуоресценции и возбуждения
            необходимо учитывать зависимость от длины волны спектра
            излучения    источника,    пропускания   монохроматоров    и
            чувствительности фотоумножителя.
    2.      На сигнал флуоресценции всегда накладываются сигналы,
            обусловленные флуоресценцией примесей растворителя, фоновой
            засветкой, релеевским и комбинационным рассеянием света,
            рассеянием, обусловленным мутностью раствора, рассеянным
            излучением, прошедшим через монохроматоры и т.д.
    3.      Спектр флуоресценции и ее интенсивность могут зависеть от
            концентрации исследуемого вещества как из-за изменения
            оптической плотности на длине волны возбуждения, так и из-за
            межмолекулярных взаимодействий, влияющих на флуоресцентные
            свойства молекул.
    4.      На флуоресцентные параметры исследуемого вещества влияют
            свойства расворителя (его полярность, вязкость, pH наличие
            растворенных веществ).
    В качестве примера рассмортрим влияние условий освещения образца.
Наблюдаемая интенсивность флуоресценции и спектральное распределение
могут зависеть от оптической плотности образца и от того, как освещается
образец. Наиболее удобно при измерениях флуоресценции наблюдение под
прямым углом к середине центрально-освещенной кюветы (рис.5а). Другие
варианты расположения включают фронтальное и нецентральное освещение
(рис.5б, 5в). Эти способы обычно используют для уменьшения эффектов
внутреннего фильтра, обусловленных большими оптическими плотностями или
мутностью раствора.
    Необходимо       учитывать,    что    интенсивность    флуоресценции
пропорциональна концентрации лишь в ограниченном диапазоне оптических
                                    9