Биотехнология: Монография. Волова Т.Г. - 138 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

СФУ | Красноярск

Составители: 

Рубрика: 

137
чаемые в течение 1980–1981 гг. препараты интерферонов были очищены
на 80 % и обладали удельной активностью более 107 международных еди-
ниц на 1 мг белка. Расширение клинических испытаний интерферонов,
начатых в этот период, зависит от повышения степени его очистки. Про-
гресс в этом направлении был достигнут применением моноклональных
антител, которые можно использовать для аффинной хроматографии (при
этом нужные белки задерживаются на колонке с антителами).
4.3. КЛЕТОЧНАЯ ИНЖЕНЕРИЯ
Традиционно для получения более активных биологических агентов
применяли селекцию и мутагенез. Селекция – это направленный отбор
мутантов – организмов, наследственность которых приобрела скачкооб-
разное изменение в результате структурной модификации в нуклеотидной
последовательности ДНК. Генеральный путь селекции – это путь от сле-
пого отбора
нужных продуцентов к сознательному конструированию их
генома. Традиционные методы отбора в свое время сыграли важную роль
в развитии различных технологий с использованием микроорганизмов.
Были отобраны штаммы пивных, винных, пекарских, уксуснокислых и др.
микроорганизмов. Ограничения метода селекции связано с низкой часто-
той спонтанных мутаций, приводящих к изменению в геноме. Ген должен
удвоиться в среднем 10
6
–10
8
, чтобы возникала мутация.
К существенному ускорению процесса селекции ведет индуцирован-
ный мутагенез (резкое увеличение частоты мутаций биологического объ-
екта при искусственном повреждении генома). Мутагенным действием
обладают ультрафиолетовое и рентгеновское излучение, ряд химических
соединений (азотистая кислота, бромурацил, антибиотики и пр.). После
обработки популяции мутагеном проводят тотальный скрининг (проверку)
полученных клонов и
отбирают наиболее продуктивные. Проводят по-
вторную обработку отобранных клонов, и вновь отбирают продуктивные
клоны, то есть проводят ступенчатый отбор по интересующему признаку.
Работа эта требует больших трудозатрат и времени. Недостатки сту-
пенчатого отбора могут быть в значительной степени преодолены при
сочетании его с методами генетического обмена.
Генетическое конструирование in vivo (клеточная инженерия)
включает
получение и выделение мутантов и использование различ-
ных способов обмена наследственной информацией живых клеток.
Основой клеточной инженерии является слияние неполовых клеток
(гибридизация соматических клеток) с образованием единого целого.
Слияние клеток может быть полным, или клетка-реципиент может приоб-
рести отдельные части донорской клетки (митохондрии, цитоплазму,
ядерный геном, хлоропласты и др
.). К рекомбинации ведут различные
процессы обмена генетической информацией живых клеток (половой и
парасексуальный процесс эукариотических клеток; конъюгация, транс-

Страницы