Составители:
Рубрика:
22
но считать нейтральной, хотя в ней имеются ионизированные группы. Условно
молекулу белка в изоэлектрическом состоянии можно изобразить как
+
NН
3
–R–СОО
–
.
Изоэлектрическая точка белка (ИТБ) – это значение рН, при кото-
ром белок переходит в изоэлектрическое состояние
.
Так как белок обычно является более сильной кислотой, чем основани-
ем, то его ИТБ лежит при рН < 7. Иначе говоря, для достижения изоэлектриче-
ского состояния в растворе должен находиться некоторый избыток кислоты для
подавления ионизации кислотных групп. Так как в ИТБ число ионизированных
оснóвных и кислотных групп одинаково, гибкая макромолекула
сворачивается
в клубок. При этом происходит вытеснение сольватированного растворителя, и
белковое соединение выпадает в осадок.
Практически все свойства растворов белков проходят через экстремаль-
ные значения в изоэлектрическом состоянии: осмотическое давление и вязкость
в изоэлектрической точке (ИЭТ) минимальны и сильно возрастают в кислой и
щелочной средах вследствие возрастания асимметрии молекул. Минимальна
также
способность вещества к набуханию, оптическая плотность раствора в
ИЭТ максимальна. Изучение всех этих свойств используется для определения
ИТБ.
3.3. Проведение эксперимента и обработка полученных данных
Для приготовления исходного раствора в качестве белка берут казеин,
который тщательно растирают в ступке до состояния пудры. Затем отвешивают
на аналитических весах навеску по указанию преподавателя (около 0,2 г), вы-
сыпают ее в мерную колбу на 50 мл и приливают 5 мл 1М раствора ацетата на-
трия. Затем в колбу добавляют 30 – 40 мл дистиллированной
воды. Колбу на-
гревают на водяной бане до температуры, не превышающей 70
°С (колба не
должна касаться дна водяной бани), и при периодическом сильном встряхива-
нии растворяют казеин. Раствор охлаждают до комнатной температуры, после
чего в мерную колбу добавляют дистиллированной воды до метки. Полученный
раствор может быть слегка мутным, но не должен содержать хлопьев и осадка.
В четыре стакана наливают воду и уксусную
кислоту в количествах, ука-
занных в таблице, а затем по 5 мл раствора казеина. Через 10 мин отмечают, в
каких колбах произошла коагуляция. В строке таблицы «наблюдения» делают-
ся пометки: «раствор прозрачный», «раствор мутный», «небольшой осадок»,
«выпадение осадка».
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 20
- 21
- 22
- 23
- 24
- …
- следующая ›
- последняя »