Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 39 стр.

        Методы прямого микроскопического учета бактерий в почве. Прямой
микроскопический метод подсчета бактерий стал возможен только после того,
как X.Кон и С.Н.Виноградский предложили применять для окрашивания
почвенной суспензии кислые краски, которые хорошо окрашивают клетки
микроорганизмов и слабо — почвенные частицы. Этот метод позволил устано-
вить,    что   в    почве   содержится   в    тысячи     раз     большее   количество
микроорганизмов, чем то, которое удается учесть методом посева почвенных
суспензий на агаризованные среды.
        Метод Виноградского в модификации Шульгиной состоит в следующем.
Среднюю пробу почвы массой 5 г помещают в колбочку объемом 250 мл,
содержащую 45 мл стерильной водопроводной воды. Почву перед анализом
рекомендуется растирать резиновым пестиком в течение 5 мин. Колбочку
энергично встряхивают 5 мин. Суспензию можно обработать ультразвуком или
на микроизмельчителе тканей. После 1—2 с отстаивания с помощью пипетки с
точно вымеренной величиной капли наносят одну каплю суспензии на
поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. Нужно следить,
чтобы суспензия в пипетке не оседала, для чего все манипуляции проводить
быстро и пипетку держать в горизонтальном положении до момента
закапывания суспензии. Одновременно с каплей суспензии на стекло наносят
одну каплю 0,1%-ного агара, очищенного от микробных клеток На стекле, куда
наносят суспензию, предварительно отмечают прямоугольник площадью 8 см2.
Нанесенную суспензию равномерно распределяют по поверхности всего
прямоугольника.       Для    опытов   используют       тщательно      очищенные     и
обезжиренные стекла. Препарат подсушивают и фиксируют в течение
нескольких минут 96%-ным спиртом или парами осмиевой кислоты и
окрашивают         карболовым   эритрозином    1ч.     Следят,    чтобы    в   течение
окрашивания препараты не высыхали. Краску смывают, погружая стекла в
стакан с водой. Препараты высушивают, и с помощью иммерсионного
объектива (90х) проводят подсчет клеток. Необходимо приготовить не менее
пяти повторных стекол. Количество клеток, просчитанных во всех препаратах

                                         38