Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 40 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

МГУ | Москва

Составители: 

Рубрика: 

39
суммируют. Расчет количества клеток (N) в 1 г абсолютно сухой почвы
проводят по формуле:
,
)100(108
9
ГВБ
PА
N
где А — общее количество учтенных на стекле клеток, Б — площадь поля
зрения (в мкм
2
), вычисленная по формуле πг
2
, В — объем нанесенной суспензии
(в мл), Г — количество просчитанных полей зрения, Р — влажность почвы (%).
Один из наиболее простых и удачных методов выявления, изучения и
количественного учета микроорганизмов, в том числе и бактерий, —
люминесцентная микроскопия в падающем свете (Звягинцев, 1987).
Почвенную суспензию (1:10) после предварительной обработки на
ультразвуковой установке переносят в мерный цилиндр на 100 мл. После
двухминутного отстаивания пипеткой отбирают 2 мл суспензии из средней
фракции (с отметкой на цилиндре 50 мл) и переносят в колбу с 18 мл воды.
Перед приготовлением препаратов колбу энергично встряхивают, суспензию
наносят микропипеткой на обезжиренные предметные стекла (0,01 мл на
препарат) и равномерно распределяют на площади 4 см
2
(квадрат 2 х 2 см).
Фиксируют нагреванием и окрашивают препарат водным раствором
акридинового оранжевого (разведение 1:10000, 2— 4 мин). Для удаления
избытка флуорохрома стекла погружают на 10 мин в стакан с водопроводной
водой. После высушивания при комнатной температуре препараты
просматривают в люминесцентном микроскопе. Для микроскопирования на
препарат наносят каплю воды и закрывают обезжиренным покровным стеклом.
Из каждого почвенного образца готовят два препарата и в каждом препарате
просматривают 20 полей зрения, чтобы данные были математически
достоверными. Количество микробных клеток в 1 г почвы вычисляют по
формуле:
,10
4
10
S
na
N
где N — количество клеток в 1 г почвы, а — среднее число клеток в поле
зрения, 5 — площадь поля зрения (мкм
2
), п — показатель разведения. 
суммируют. Расчет количества клеток (N) в 1 г абсолютно сухой почвы
проводят по формуле:
                                     А  8  10 9 ( P  100)
                                N                           ,
                                           БВГ
где А — общее количество учтенных на стекле клеток, Б — площадь поля
зрения (в мкм2), вычисленная по формуле πг2, В — объем нанесенной суспензии
(в мл), Г — количество просчитанных полей зрения, Р — влажность почвы (%).
     Один из наиболее простых и удачных методов выявления, изучения и
количественного учета микроорганизмов, в том числе и бактерий, —
люминесцентная микроскопия в падающем свете (Звягинцев, 1987).
Почвенную    суспензию     (1:10)      после          предварительной     обработки   на
ультразвуковой установке переносят в мерный цилиндр на 100 мл. После
двухминутного отстаивания пипеткой отбирают 2 мл суспензии из средней
фракции (с отметкой на цилиндре 50 мл) и переносят в колбу с 18 мл воды.
Перед приготовлением препаратов колбу энергично встряхивают, суспензию
наносят микропипеткой на обезжиренные предметные стекла (0,01 мл на
препарат) и равномерно распределяют на площади 4 см2 (квадрат 2 х 2 см).
Фиксируют    нагреванием    и    окрашивают                препарат   водным   раствором
акридинового оранжевого (разведение 1:10000, 2— 4 мин). Для удаления
избытка флуорохрома стекла погружают на 10 мин в стакан с водопроводной
водой.   После   высушивания         при       комнатной         температуре   препараты
просматривают в люминесцентном микроскопе. Для микроскопирования на
препарат наносят каплю воды и закрывают обезжиренным покровным стеклом.
Из каждого почвенного образца готовят два препарата и в каждом препарате
просматривают 20 полей зрения, чтобы данные были математически
достоверными. Количество микробных клеток в 1 г почвы вычисляют по
формуле:
                                         4a  n 10
                                    N         10 ,
                                          S
где N — количество клеток в 1 г почвы, а — среднее число клеток в поле
зрения, 5 — площадь поля зрения (мкм2), п — показатель разведения.
                                            39

Страницы