Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 42 стр.

     Для исследования деталей строения клетки — органоидов, спор,
жгутиков, различных включений — приготавливают фиксированные и
окрашенные препараты. Препарат бактерий для фиксации и окраски (мазок)
готовят на чистых обезжиренных стеклах. На приготовленное стекло наносят
каплю суспензии бактериальных клеток и размазывают ее тонким слоем по
поверхности стекла с помощью петли или краем покровного стекла. Мазки
высушивают при комнатной температуре.
     При фиксации необходимо возможно полнее сохранить прижизненную
структуру бактериальных клеток. Известно много способов фиксации
препарата, наиболее распространенный — фиксация жаром (фломбирование).
Стекло с высушенным мазком проводят три-четыре раза через пламя горелки
мазком вверх, пока не появляется ощущение жжения при прикладывании стек-
ла к тыльной стороне руки. Для изучения формы клетки этот способ фиксации
удовлетворителен. Для исследования тонкого строения бактерий препараты
фиксируют химическими веществами — безводным метиловым спиртом (5
мин), 96%-ным этиловым спиртом (5 мин), смесью равных объемов этилового
спирта и эфира (20 мин), фиксатором Карнуа (этиловый спирт — 60 мл,
хлороформ — 30 м, ледяная уксусная кислота — 10 мл; фиксация — 15 мин).
     После фиксации препарат окрашивают. Существуют различные методы
покраски.   Наиболее   употребительные    красители:     метиленовый   синий
(спиртовой или водный раствор); фуксин основной (спиртовой или водно-
спиртовой раствор), применяются и более сложные методы покраски с
использованием нескольких красителей, например, окраска по Граму.
      Дифференциацию бактерий по Граму можно производить и без
окрашивания.   Для     разделения   бактерий   на      грамположительные   и
грамотрицательные (что коррелирует с особенностями химического состава
клеточной стенки этих двух групп бактерий) используют быстрый и простой
метод, основанный на взаимодействии бактериальной массы с 3% раствором
КОН. Клетки бактерий (лучше 1-2 суточные) помещают петлей в каплю 3%
КОН на предметное стекло, размешивают круговыми движениями и через 5-6 с

                                     41