Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 58 стр.

предельных разведений.
      Окисление      метана.    Для     получения     накопительных     культур
метанокисляющих бактерий инокулируют жидкие и агаризованные среды
почвенными суспензиями и помещают их в метано-воздушную среду при
соответствующей температуре (30, 37, 45, 55, 60°С). Если необходимо выявить
весь видовой состав метанокисляющих бактерий, содержащихся в исследуемом
образце, то на первом этапе накопительную культуру следует получать на
твердой среде. Последующие этапы выделения накопительной культуры
необходимо проводить на жидкой среде следующего состава (г/л): KNO3 - 1;
КН2РО4 - 0,4; К2НРO4 - 0,4; NaCI - 0,3; MgS04 . 7H20 - 0,3; CaCl2 - 0,02; FeCI3 -
0,001. Для приготовления сред используют водопроводную кипяченую
фильтрованную воду (50%) и дистиллированную воду (50%). Фосфорные соли
растворяют в дистиллированной воде. Для приготовления твердых сред
пользуются очищенным агаром Дифко или силикагелем. Посуду очищают от
органических примесей. В качестве источника углерода в среде используют
метан. Опыты проводят в колбе, снабженной двумя стеклянными трубками с
кранами и резиновой пробкой. В одну из трубок под давлением вводят метан,
второй кран в это время открыт для выхода воздуха. Закрывают оба крана,
колбу ставят на 3 - 4 дня при 30 - 37°. На поверхности жидкости появляется
красноватая пленка метанокисляющих бактерий.
     Для выращивания метанокисляющих бактерий на твердых средах
используют специальные сосуды, которые герметизируют при помощи
металлической крышки, оборудованной двумя штутцерами, через которые
вводится и выводится газовая смесь. В сосуды помещают чашки с
агаризованной средой указанного выше состава, инокулированные почвенной
суспензией, и заполняют газовой смесью метан - воздух (1:1 — 1:4). Смену
газовой фазы в сосуде осуществляют каждые двое суток. Сосуды помещают в
термостат. Спустя 5—10 суток на агаре появляются визуально различимые
колонии метанокисляющих бактерий.
     Колонии метанокисляющих бактерий получают также при использовании

                                       57