Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 61 стр.

полужидкую среду без азота следующего состава (г/л): яблочнокислый натрий
или кальций - 0,5; КН2Р04 - 0,4; К2НР04 - 0,1; MgS04 . 7H20 - 0,2; NaCI - 0,1;
CaCl2 - 0,02; FeCI3 - 0,01; NaMoO4 - 2H20 - 0,002; дрожжевой экстракт - 5 мл;
агар -1,75; бромтимоловый синий - 5 мл (0,5%-ный спиртовой раствор); рН 6,8.
     Инкубацию проводят в течение недели при 32°. Под поверхностью среды
азоспириллы образуют белые колонии 2 - 4 мм в диаметре.
     Колонии пересевают в полужидкую среду такого же состава с 15 мл
дрожжевого экстракта на 1 л. Штаммы поддерживаются на среде того же
состава в пробирках с полужидкой (0,3% агара) средой. Нитрогеназную
активность проверяют ацетиленовым методом.
     Для обнаружения в почве анаэробных азотфиксирующих бактерий рода
Clostridium пользуются методом накопительной культуры в жидкой среде
Виноградского следующего состава (г/л): глюкоза - 20; К2НР04 - 0,1; MnS04,
NaCI, FeS04 - следы; MgS04 . 7H20 - 0,5; СаСОз - 20,0. Среду наливают в
пробирки высоким слоем, засевают комочками исследуемой почвы и па-
стеризуют 10 мин при 80° в целях освобождения от сопутствующих аэробных
бесспоровых бактерий. Через 2—3 суток после посева среда мутнеет, из нее
начинают выделяться пузырьки газа, что свидетельствует о развитии
анаэробных споровых бактерий, вызывающих в соответствующих элективных
условиях маслянокис-лое брожение. Глюкоза при этом превращается в
масляную кислоту и углекислый газ, а в пробирках образуется много пены,
появляется запах масляной и уксусной кислот. Последняя также является
одним из продуктов маслянокислого брожения. Обычно этот метод
используют для обнаружения клеток Clostridium pasteurianum, которые легко
увидеть при микроскопировании осадка. Так называемая гранулезная реакция
способствует выявлению клеток в осадке. Перед спорообразованием в клетках
Clostridium pasteurianum накапливается много гранулезы, для которой
характерно окрашивание раствором Люголя. Каплю жидкости, содержащую
клетки клостридиев, накрывают покровным стеклом и к одному краю стекла
подносят пипетку с раствором Люголя, а к другому — фильтровальную

                                     60