Практикум по биологии почв. Зенова Г.М - 63 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

МГУ | Москва

Составители: 

Рубрика: 

62
держивают в спирте 1 мин и промывают в трех последовательных чашках со
стерильной водой, выдерживая по 10 мин в каждой. После промывания
клубенек переносят в стерильную чашку и раздавливают скальпелем в капле
воды. Одну петлю взвеси переносят на поверхность бобового агара в чашках
Петри и размазывают шпателем. Этим же шпателем делают посев еще на двух
последовательных чашках. Спустя 1—2 суток инкубации в термостате при 28—
30° на чашках вырастают слизистые беловатые непрозрачные колонии, иногда
похожие на капли стеарина. Бобовый агар готовят из бобового отвара: 50 г
бобов (белой фасоли или гороха) заливают 1 л воды и варят до набухания и
растрескивания кожуры (но не до разваривания), фильтруют через вату,
доводят водопроводной водой до 1 л, добавляют 1% сахара, 0,05 мл 0,1%-ного
раствора К
2
НРО
4
и раствором соды устанавливают рН 7. Для получения
плотной среды добавляют 1,5—2% агара. Стерилизуют при 121° 20 мин.
Для выделения актиномицетов рода Frankia из азотфиксирующих
клубеньков на корнях небобовых растений (лоха серебристого или облепихи
крушиновидной) используют следующую методику: клубеньки растений,
выращенных в питомнике (5 лет) или оранжерее (1—2 года) в почвенной
культуре, тщательно отмывают водой с лаурилсульфатом (0,02%) и отделяют
от друз клубенька терминальные доли. Стерилизацию проводят 3%-ным
раствором Os0
4
в течение 5 мин. После 5-кратного отмывания окиси осмия
водой дольки помещают на 15 мин в буфер (Na
2
HPО
4
.
7H
2
0 - 2,16 г/л; КН
2
РО
4
-
0,2 г/л; NaCl - 0,8 г/л; поливинилпиролидон МВ-40000 - 1,0 г; рН 7,2). Затем
каждую дольку клубенька переносят в новую порцию буфера и разделяют на
части скальпелем и иглой, соблюдая стерильность. Полученные кусочки (1—2
мм) раскладывают по одному в пробирки (20 х 150 мм) с 14 мл
модифицированной среды Квиспела (МСК) следующего состава (г/л): К
2
НР
4
-
0,3; NaH
2
P0
4
- 0,2; MgS0
4
.
7H
2
O - 0,2; KC1 - 0,2; дрожжевой экстракт Дифко -
0,5; пептон Дифко - 0,5; лецитин - 0,5
.
10
-2
или Твин-80 - 1 мл/л; FeC
6
H
5
O
7
.
nH
2
O - 0,01; раствор микроэлементов - 1 мл/л (Н
3
ВО
3
- 0,15 г; MnS0
4
.
7H
2
0 -
0,08 г; ZnSО
4
.
7H
2
0 - 0,06 г; CuS0
4
.
7H
2
0 - 0,01 г; (NH
4
)
6
Mo
7
O
25
.
4Н
2
0 - 0,02 г; 
держивают в спирте 1 мин и промывают в трех последовательных чашках со
стерильной водой, выдерживая по 10 мин в каждой. После промывания
клубенек переносят в стерильную чашку и раздавливают скальпелем в капле
воды. Одну петлю взвеси переносят на поверхность бобового агара в чашках
Петри и размазывают шпателем. Этим же шпателем делают посев еще на двух
последовательных чашках. Спустя 1—2 суток инкубации в термостате при 28—
30° на чашках вырастают слизистые беловатые непрозрачные колонии, иногда
похожие на капли стеарина. Бобовый агар готовят из бобового отвара: 50 г
бобов (белой фасоли или гороха) заливают 1 л воды и варят до набухания и
растрескивания кожуры (но не до разваривания), фильтруют через вату,
доводят водопроводной водой до 1 л, добавляют 1% сахара, 0,05 мл 0,1%-ного
раствора К2НРО4 и раствором соды устанавливают рН 7. Для получения
плотной среды добавляют 1,5—2% агара. Стерилизуют при 121° 20 мин.

      Для выделения актиномицетов рода Frankia из азотфиксирующих
клубеньков на корнях небобовых растений (лоха серебристого или облепихи
крушиновидной) используют следующую методику: клубеньки растений,
выращенных в питомнике (5 лет) или оранжерее (1—2 года) в почвенной
культуре, тщательно отмывают водой с лаурилсульфатом (0,02%) и отделяют
от друз клубенька терминальные доли. Стерилизацию проводят 3%-ным
раствором Os04 в течение 5 мин. После 5-кратного отмывания окиси осмия
водой дольки помещают на 15 мин в буфер (Na2HPО4 . 7H20 - 2,16 г/л; КН2РО4 -
0,2 г/л; NaCl - 0,8 г/л; поливинилпиролидон МВ-40000 - 1,0 г; рН 7,2). Затем
каждую дольку клубенька переносят в новую порцию буфера и разделяют на
части скальпелем и иглой, соблюдая стерильность. Полученные кусочки (1—2
мм) раскладывают по одному в пробирки (20 х 150 мм) с 14 мл
модифицированной среды Квиспела (МСК) следующего состава (г/л): К2НР4 -
0,3; NaH2P04 - 0,2; MgS04 . 7H2O - 0,2; KC1 - 0,2; дрожжевой экстракт Дифко -
0,5; пептон Дифко - 0,5; лецитин - 0,5 . 10   -2
                                                   или Твин-80 - 1 мл/л; FeC6H5O7   .


nH2O - 0,01; раствор микроэлементов - 1 мл/л (Н3ВО3 - 0,15 г; MnS04 . 7H20 -
0,08 г; ZnSО4 . 7H20 - 0,06 г; CuS04 . 7H20 - 0,01 г; (NH4)6Mo7O25 . 4Н20 - 0,02 г;
                                        62

Страницы