Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 18 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ОмГУ | Омск

Составители: 

Рубрика: 

35
центра зоны (пятна), и расстояния L, пройденного элюентом от
точки нанесения пробы до фронта элюента:
R
f
=X/L. (3)
Диапазон изменения R
f
– от 0 до 1. При R
f
=0 вещество не дви-
жется, остается в точке нанесения (на старте), при R
f
=1 вещество не
задерживается неподвижной фазой и движется с фронтом раство-
рителя.
Методика измерений
Разделение методом ТСХ на силикагеле смеси четырех нук-
леозидов (аденозин, цитидин, уридин, тимидин) и их идентифика-
ция путем сравнения со свидетелями (растворами чистых компо-
нентов).
Особенности в строении этих веществ приводят к различной
адсорбции их поверхностью силикагеля
и, следовательно, к различ-
ной скорости движения при хроматографии. В порядке увеличения
скорости движения (увеличения R
f
) эти вещества располагаются в
следующем порядке:
С<А<<U<Т.
Значительное отставание С и А от других нуклеозидов объяс-
няется не только тем, что у них больше полярных функциональных
групп, но и наличием у них первичных аминогрупп, благодаря ко-
торым они вступают во взаимодействие с отрицательно заряжен-
ными группами силикагеля и
поэтому задерживаются. Отставание
С от А происходит из-за большей основности его аминогруппы, а
большая скорость Т по сравнению с U объясняется, по-видимому,
отсутствием у него 2'-оксигруппы, а также затрудненностью кон-
такта двойной связи пиримидинового кольца с поверхностью сили-
кагеля (из-за присутствия 5-метильной группы).
36
HOC
H
2
OH
OH
О
O
N - H
N
O
Уридин (U)
H
3
C
HOC
H
2
OH
О
O
N - H
N
O
Тимидин (T)
HOC
H
2
OH
OH
О
NH
2
N
N
O
Цитидин (C)
N
N
N
N
NH
2
O
OH
OH
HOC
H
2
Аденозин (A)
При выборе растворителя для хроматографии нуклеозидов
воспользуемся схемой Шталя (см. выше). Так как вещества поляр-
ные, а сорбент высокоактивный, то нужен полярный растворитель.
Этому требованию удовлетворяет система хлороформ-метанол-
вода (4:4:1).
В работе будем пользоваться следующими стандартными ус-
ловиями для ТСХ:
1. Линия старта располагается в 15 мм от нижнего края пла-
стинки
.
2. Расстояние между пятнами (и от боковой стороны) ≈10 мм.
3. Размер пятен ≈2 мм. 
центра зоны (пятна), и расстояния L, пройденного элюентом от                                    O                                    O
точки нанесения пробы до фронта элюента:                                                                                  H 3C
                                                                                                    N-H                                  N- H
                              Rf =X/L.                           (3)
      Диапазон изменения Rf – от 0 до 1. При Rf =0 вещество не дви-       HOCH2      О       N                                       N
                                                                                                        O        HOCH2     О                 O
жется, остается в точке нанесения (на старте), при Rf =1 вещество не
задерживается неподвижной фазой и движется с фронтом раство-
рителя.

      Методика измерений                                                        OH       OH                          OH
      Разделение методом ТСХ на силикагеле смеси четырех нук-                      Уридин (U)                        Тимидин (T)
леозидов (аденозин, цитидин, уридин, тимидин) и их идентифика-
ция путем сравнения со свидетелями (растворами чистых компо-
нентов).                                                                                        NH2
      Особенности в строении этих веществ приводят к различной                                                                           NH2
адсорбции их поверхностью силикагеля и, следовательно, к различ-
                                                                                                    N                            N           N
ной скорости движения при хроматографии. В порядке увеличения             HOCH2      О          N                                N
скорости движения (увеличения Rf) эти вещества располагаются в                                          O        HOCH2 O                 N
следующем порядке:
                           С<А<

Страницы