Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 16 стр.

разделение веществ в соответствии с их коэффициентами распре-      (например, силуфол УФ-254). Это существенно упрощает технику
деления α.                                                         хроматографирования, обеспечивает стандартность операций и
      Термин ТСХ объединяет несколько методов. В зависимости       воспроизводимость результатов.
от природы применяемого тонкого слоя и, как следствие, механиз-          Адсорбционная ТСХ основана на адсорбции растворенного
ма взаимодействия хроматографируемого вещества с неподвижной       вещества поверхностью сорбента. Адсорбция встречается довольно
фазой различают следующие виды ТСХ:                                часто, но особенно проявляется только для фаз с большой поверх-
      1) Адсорбционная хроматография.                              ностью. В состоянии адсорбционного равновесия (равенство скоро-
      Тонкий слой, чаще всего: силикагель, окись алюминия, ки-     стей сорбции и десорбции при постоянной температуре) количество
зельгур. Механизм распределения: адсорбция растворенного веще-     адсорбированного на единице поверхности вещества n следующим
ства на поверхности твердой фазы.                                  образом зависит от концентрации вещества в растворе с (изотерма
      2) Распределительная хроматография.                          адсорбции Фрейндлиха):
      Тонкий слой – слабоактивные сорбенты: целлюлоза, гипс, це-                               n = асb,                        (1)
лит, силикагель, пропитанный водой. Механизм распределения:        где a и b – константы для данной системы адсорбент-вещество-
распределение между неподвижной жидкой фазой, закрепленной на      растворитель. Графиком этого уравнения является кривая, изобра-
сорбенте, и подвижной фазой.                                       женная на рис. 1.
      3) Ионообменная хроматография.
      Тонкий слой – ионообменные смолы: ДЭАЭ-целлюлоза, ДЭ-                        n
АЭ-сефадексы, дауэксы и др. Механизм распределения: ионный
обмен между растворенным веществом и заряженными группами
неподвижной фазы.
      В каждом конкретном случае могут иметь место различные
сочетания этих вариантов. Например, адсорбционная хроматогра-
фия на силикагеле может сопровождаться или распределительной
(силикагель всегда содержит адсорбированную воду, которая, если                                                  c
ее много, может служить неподвижной фазой), или ионообменной
хроматографией (силикагель – высушенный гель слабодиссоцииро-                  Рис. 1. Изотерма адсорбции из раствора
ванной кремневой кислоты – при хроматографии оснований прояв-
ляет свойства катионообменника). Вместе с тем распределительная           При этом отношение концентраций вещества в двух фазах
и ионообменная хроматография сопровождается адсорбцией на по-      ⎛ c ⎞ не является постоянной величиной, оно увеличивается с рос-
                                                                   ⎜ ⎟
верхности неподвижной твердой фазы.                                ⎝n⎠
                                                                   том концентрации. Поэтому пятна веществ при адсорбционной
     Адсорбционная хроматография                                   хроматографии четко очерчены сверху и размыты снизу в виде хво-
     Из рассмотренных вариантов ТСХ чаще всего применяют ад-       стов. Для уменьшения этого эффекта стараются работать в области
сорбционную хроматографию, которая лучше освоена, проста по        небольших концентраций веществ, где функция разделения близка
выполнению и, кроме того, для этого метода налажено промыш-        к линейной.
ленное производство пластинок с закрепленным слоем силикагеля

                              31                                                                  32