Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 15 стр.

                                                                        К числу несомненных достоинств хроматографических мето-
               Лабораторная работа №4                             дов исследования и анализа относится возможность одновременной
                                                                  реализации большого числа параметров, характеризующих разде-
      Идентификация нуклеозидов в смеси                           ление, идентификацию, количественную оценку компонентов ис-
с помощью метода тонкослойной хроматографии                       следуемой смеси и физико-химические свойства сорбатов и сорбен-
                                                                  тов. Вследствие этого хроматография является многоканальным
     Цель работы: изучение метода тонкослойной хроматогра-        источником информации. Важным является возможность осущест-
фии; разделение смеси нуклеозидов и определение подвижности       вить в ходе этих процессов большое число взаимодействий – от
хроматографических зон.                                           чисто физических (ситовые эффекты) до межмолекулярных и хе-
                                                                  мисорбционных, что позволяет реализовать многообразные меха-
      Приборы, принадлежности и реактивы: камера для хрома-       низмы, приводящие к разделению компонентов систем практически
тографирования, листы силуфола УФ-254 15х5 см, ультрафиолето-     любой сложности.
вая лампа для обнаружения УФ-поглощающих пятен, капилляры
для нанесения растворов веществ, 1%-й водный раствор смеси нук-        Основы метода тонкослойной хроматографии
леозидов, 1%-е водные растворы уридина (U), тимидина (T), цити-         Тонкослойная хроматографая (ТСХ) является планарной раз-
дина (C), аденозина (A), система растворителей: хлороформ-        новидностью жидкостной хроматографии, в которой подвижная
метанол-вода (4:4:1), карандаш, линейка.                          фаза движется в пористой среде слоя адсорбента. Основной коли-
                                                                  чественной характеристикой ТСХ служит скорость перемещения
     Основы хроматографии                                         разделяемых веществ по пластине. Она определяется как отноше-
      Хроматография – физический метод анализа и исследования     ние времени движения в токе элюента (растворителя) ко времени
веществ и их смесей, основанный на разделении компонентов за      удерживания за счет сорбции. При этом каждая молекула вещества
счет распределения их при перемещении через слой неподвижной      участвует в многочисленных актах сорбции и десорбции. В конце
фазы потоком подвижной фазы. В основе хроматографических          процесса хроматографирования каждая зона проходит характерное
процессов лежат явления сорбции и десорбции, многократное по-     расстояние, определяемое положением центра хроматографической
вторение актов которых в этих средах при перемещении через слой   зоны, которая размывается за счет флуктуации средней скорости
неподвижной фазы приводит к разделению компонентов за счет        индивидуальных молекул при движении по слою на пластине.
разницы в константах распределения индивидуальных веществ ме-           ТСХ широко используется в химии природных соединений
жду двумя фазами, перемещающимися друг относительно друга. На     как весьма удобный и эффективный метод разделения. Главное ее
разделяемые системы могут накладываться те или иные поля, на-     преимущество перед другими методами – быстрота разделения (20–
пример электрические, гравитационные или другие, происходить      30 мин. в сравнении с 12–16 часами при бумажной хроматографии)
изменения условий во взаимодействующих фазах, что создает         при хорошем его качестве. Метод ТСХ заключается в следующем:
большое число возможных вариантов хроматографии. Наиболее         на стеклянную пластинку (или металлическую фольгу) наносят
важным признаком хроматографии является динамический харак-       тонкий слой какого-либо сорбента. На линию старта наносят каплю
тер процесса, при котором возникают градиенты в распределении     раствора вещества, высушивают, нижний край пластинки помеща-
концентраций молекул или частиц.                                  ют в систему растворителей. За счет сил капиллярного смачивания
                                                                  жидкость быстро продвигается по пластинке, при этом происходит

                              29                                                                30