Медицинская биохимия. Бескровная Е.В - 28 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ОмГУ | Омск

Составители: 

Рубрика: 

55
Расчет концентрации глюкозы в исследуемых образцах про-
изводится по формуле:
к
к
C
A
A
C =
, (1)
где C – концентрация глюкозы в исследуемом растворе, ммоль/л; A
– оптическая плотность исследуемого раствора; A
к
– оптическая
плотность калибровочного раствора; C
к
– концентрация глюкозы в
калибровочном растворе (10 ммоль/л).
Погрешность этого метода составляет ±0,7 ммоль/л в диапа-
зоне от 2–20 ммоль/л.
Методика измерений
Для приготовления рабочего раствора необходимо раство-
рить одну таблетку «ферменты-хромогены» в 100 мл дистиллиро-
ванной воды. Одновременно с этим производится центрифугирова-
ние 1 мл крови при 1000 об/мин в
течение 15 мин для получения
плазмы. Надосадочная жидкость переносится в чистую пробирку и
используется для приготовления анализируемых растворов. Для
этого необходимо смешать 2 мл рабочего раствора и 0,02 мл плаз-
мы.
Для проведения измерений необходимы калибровочный рас-
твор и раствор сравнения. Приготовление калибровочного раствора
осуществляется путем смешивания 2 мл рабочего раствора и 0,02
мл раствора
с известной концентрацией глюкозы. Раствор сравне-
ния готовится из рабочего раствора и дистиллированной воды
(пропорции те же).
После приготовления все растворы тщательно перемешивают
и инкубируют 25 мин при температуре 18–25°C.
После окончания инкубации измеряется величина оптической
плотности анализируемого и калибровочного растворов относи-
тельно раствора сравнения посредством спектрофотометра Spectro
2000 RS в кюветах с длиной
оптического пути 1 см при длине вол-
ны 500 нм.
56
Порядок выполнения работы
1. Ознакомиться с устройством и принципом работы спек-
трофотометра Spectro 2000 RS.
2. Приготовить рабочий раствор.
3. Приготовить анализируемый, калибровочный растворы и
раствор сравнения.
4. Измерить оптическую плотность анализируемого и калиб-
ровочного растворов относительно раствора сравнения при 500 нм.
5. По формуле (1) вычислить концентрацию глюкозы в ана-
лизируемом растворе. По рассчитанному значению определить уро-
вень гликемии (гипогликемия, нормальный уровень, гиперглике-
мия).
Рекомендуемый библиографический список
1. Ямковой В.И. Курс лекций по биохимии: Учебное пособие:
В 2 ч. Омск: ОмГУ, 2003.
2. Справочник по функциональной диагностике / Под ред.
И.А. Кассирского. М.: Медицина, 1980.
3. Берштейн И.Я., Каминский Ю.Л. Спектрофотометрический
анализ в органической химии. Л.: Химия, 1986. 
     Расчет концентрации глюкозы в исследуемых образцах про-           Порядок выполнения работы
изводится по формуле:
                                                                        1. Ознакомиться с устройством и принципом работы спек-
                             A                                    трофотометра Spectro 2000 RS.
                          C=    Cк ,                       (1)
                             Aк                                         2. Приготовить рабочий раствор.
где C – концентрация глюкозы в исследуемом растворе, ммоль/л; A         3. Приготовить анализируемый, калибровочный растворы и
– оптическая плотность исследуемого раствора; Aк – оптическая     раствор сравнения.
плотность калибровочного раствора; Cк – концентрация глюкозы в          4. Измерить оптическую плотность анализируемого и калиб-
калибровочном растворе (10 ммоль/л).                              ровочного растворов относительно раствора сравнения при 500 нм.
      Погрешность этого метода составляет ±0,7 ммоль/л в диапа-         5. По формуле (1) вычислить концентрацию глюкозы в ана-
зоне от 2–20 ммоль/л.                                             лизируемом растворе. По рассчитанному значению определить уро-
                                                                  вень гликемии (гипогликемия, нормальный уровень, гиперглике-
     Методика измерений                                           мия).

      Для приготовления рабочего раствора необходимо раство-           Рекомендуемый библиографический список
рить одну таблетку «ферменты-хромогены» в 100 мл дистиллиро-
ванной воды. Одновременно с этим производится центрифугирова-            1. Ямковой В.И. Курс лекций по биохимии: Учебное пособие:
ние 1 мл крови при 1000 об/мин в течение 15 мин для получения     В 2 ч. Омск: ОмГУ, 2003.
плазмы. Надосадочная жидкость переносится в чистую пробирку и            2. Справочник по функциональной диагностике / Под ред.
используется для приготовления анализируемых растворов. Для       И.А. Кассирского. М.: Медицина, 1980.
этого необходимо смешать 2 мл рабочего раствора и 0,02 мл плаз-          3. Берштейн И.Я., Каминский Ю.Л. Спектрофотометрический
мы.                                                               анализ в органической химии. Л.: Химия, 1986.
      Для проведения измерений необходимы калибровочный рас-
твор и раствор сравнения. Приготовление калибровочного раствора
осуществляется путем смешивания 2 мл рабочего раствора и 0,02
мл раствора с известной концентрацией глюкозы. Раствор сравне-
ния готовится из рабочего раствора и дистиллированной воды
(пропорции те же).
      После приготовления все растворы тщательно перемешивают
и инкубируют 25 мин при температуре 18–25°C.
      После окончания инкубации измеряется величина оптической
плотности анализируемого и калибровочного растворов относи-
тельно раствора сравнения посредством спектрофотометра Spectro
2000 RS в кюветах с длиной оптического пути 1 см при длине вол-
ны 500 нм.



                              55                                                                 56

Страницы