Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В. - 6 стр.

Влага существенно влияет на селективность неполярной         точки     зрения    необходимо    оценить    возможности
системы растворителей.                                       имеющегося насоса и опасность деформации гранул
   После того как определен принцип разделения, подобраны    используемого сорбента.
элюент и размеры частиц сорбента, необходимо определить,           Диаметр колонки теоретически не должен сказываться
какое разрешение должно быть достигнуто, какое количество     ни на одной из характеристик хроматографического
вещества необходимо разделить и насколько важен фактор        процесса: ни на скорости миграции, ни на форме зон, ни на
времени. На практике все параметры взаимосвязаны и условия    разрешении. Например, колонку, площадь сечения которой в
хроматографического разделения можно оптимизировать           100 раз превышает площадь сечения другой колонки (при
только по одному из трех параметров.                          идентичности всех прочих параметров, включая длину),
                                                              можно рассматривать как 100 колонок меньшего диаметра,
               2.2. ОПТИМИЗАЦИЯ                               собранных параллельно, в один «пучок». В реальных
          УСЛОВИЙ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ                            случаях выбор сечения колонки сказывается на
                                                              характеристиках хроматографического процесса. С одной
                                                              стороны, диаметр колонки должен не менее чем в 50 раз
     В большинстве случаев перед хроматографическим           превышать диаметр гранул, иначе упомянутое ранее влияние
процессом стоит задача надежного разделения двух или          стенок колонки может вызвать заметное расширение зоны. С
более заранее известных компонентов исходной смеси. Если      другой стороны, колонки диаметром более 2 см отличаются
хроматографическая система уже определена, то в               худшими характеристиками за счет неоднородностей тока
распоряжении экспериментатора еще остается возможность        жидкости в них, так как при набивке их сорбентом трудно
выбора целого ряда физических параметров процесса с           обеспечить равномерность его распределения по всему
целью оптимизации условий разрешения зон (пиков) в этой       сечению. Эти трудности особенно сильно выражены при
системе. Последовательно рассмотрим следующий ряд             гель-фильтрации, где зоны движутся очень близко друг за
параметров: геометрия колонки, размер гранул, набивка         другом. Тем не менее диаметр колонки нередко заметно
колонки, скорость элюции, загрузка колонки. Рассмотрение      увеличивают ради большей загрузки препаратом, с тем
возможно с позиции улучшения разрешения и одновременно        чтобы при этом сохранить малой ширину исходной зоны.
уменьшения     продолжительности     хроматографического
процесса.                                                                         Размер гранул
                                                                С уменьшением диаметра гранул d условия
                                                             хроматографии заметно улучшаются: уменьшается высота
                   Геометрия колонки                         теоретической тарелки, дисперсия зон, увеличивается
     Длина колонки учитывается для поддержания               разрешение, повышается оптимальная скорость элюции.
оптимальной скорости элюции. Для слишком длинной             Однако при этом происходит сильный рост необходимого
колонки поддержание оптимальной скорости элюции может        перепада давления (АР). Необходимый перепад давления
потребовать очень большого перепада давлений. С этой         растет пропорционально третьей степени уменьшения