Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 12 стр.

весу количеством дистиллированной воды, и проводят через       анализируемого компонента. Условия хроматографического
весь ход анализа. В гексановом экстракте холостой пробы при    анализа при этом одинаковы. Градуировочные растворы
вводе в хроматограф витамины не должны обнаруживаться.         ретинолацетата готовят из исходного раствора в этаноле
       Примечание: Если        содержание      определяемых    (п.4.6), для чего отбирают определенный объем этого раствора
витаминов в анализируемой пробе выходит за пределы             \/исх и проводят через весь ход анализа (п.8).При
диапазона линейности, то полученный гексановый экстракт        приготовлении градуировочных растворов ретинолпальмитата
разбавляют до 20-50 см3 гексаном, что учитывается при          руководствуются п.4.7, а-токоферолацетата - п.4.8.
расчетах. Степень разбавления (Q) равна соотношению                    В память анализатора вводят значения параметров,
конечного объема после разбавления и объема аликвотной         указанные ниже для каждого из веществ, и затем дозируют по
порции исходного экстракта, взятого для разбавления.           10 мм3 полученных растворов в хроматограф.
       7.3. Подготовка пробы при анализе молока и молочной             8.1.1.Условия градуировки для витамина Е (а-
сыворотки.                                                     токоферола):
       Отобранные пробы молока доводят до комнатной                    Колонка нормальнофазная 80x2 мм,
температуры и тщательно перемешивают.                                  Сорбент - Separon SGX, зернение 5 мкм
       В заранее приготовленные пронумерованные пробирки               Элюент - изопропанол : гексан 1:200
1 и 2 вносят по 2,5 см3 спиртового раствора аскорбиновой               Расход элюента 200 мм3/мин
кислоты (п.4.5). Затем в пробирку N 1 вносят 1 см3                     Ввод петлей 10 мм3
дистиллированной воды, а в пробирку N 2 - 1 см3 молока,                Светофильтр в канале возбуждения - 292, в канале
перемешивают и оставляют на 5 мин. Через 5 мин во все          регистрации -
пробирки добавляют по 2,5 см3 гексана, экстрагируют в                  Чувствительность минимальная
течение 30 сек при помощи микросмесителя, дают отстояться              Корр. опорн. нет
2 мин и затем вновь перемешивают пробу в течение 30 сек при            Корр. проп. есть
помощи         микросмесителя.       При      необходимости            Размах шкалы        111=0.5-1.5
центрифугируют образцы в течение 5 минут при 2-3 тыс.                  Вычитание фона      Ф=0.00
об/мин.                                                                Сглаживание С=1
       Из верхнего гексанового слоя центрифугата,                      Диапазон концентраций а-токоферола 1.0-20.0 мкг /см3
содержащего жирорастворимые витамины, отбирают пробу на        Время выхода а-токоферолацетата – 3 мин
анализ методом ВЭЖХ.                                                   8.1.2.Условия градуировки для витамина А (ретинола):
       8. ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ                                 Колонка нормальнофазная 80x2 мм,
       8.1. Градуировка анализатора.                                   Сорбент - Separon SGX, зернение 5 мкм Элюент -
       Подготовку хроматографической системы к работе          изопропанол : гексан 1:200 Расход элюента 200 мм3/мин Ввод
проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации          петлей 10 мм3
анализатора "Флюорат-02" и хроматографической приставки.               Светофильтр в канале возбуждения - А1, в канале
Градуировка      производится     отдельно   для     каждого   регистрации -А2