Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 13 стр.

       Чувствительность минимальная                           использовать метод одного стандарта, с концентрацией
       Корр. опорн. нет                                       витаминов близкой к концентрации витаминов в
       Корр. проп. есть                                       анализируемых объектах. Таким образом, в контрольный
       Размах шкалы        111=0.01-0.03                      раствор вводятся известные концентрации Сст ретинолацетата
       Вычитание фона      Ф=0.00                             и Сст токоферола ацетата, которые проводятся через весь ход
       Сглаживание С=4                                        анализа, экстрагируются гексаном в виде ретинола и а-
       Диапазон концентраций ретинолацетата 0.2 до 5.0        токоферола и вводятся в хроматограф как стандарты.
       3
мкг/см Время выхода цис-ретинола          1уд - 12мин                8.2. Измерение массовой концентрации витаминов А и
       транс-ретинола      2 уд.- 16 мин.                     Е в пробе после омыления липидов.
       8.1.3.Условия    градуировки      для     витамина А          В хроматограф вводят при помощи дозирующей петли
(ретинолпальмитата): (Проводится при определении молока и     по 10 мм3 полученных по п.7.2 растворов в такой
молочной сыворотки) Колонка нормальнофазная 80x2 мм,          последовательности:
Сорбент - Separon SGX, зернение 5 мкм Элюент - изопропанол           холостая реактивная проба;
: гексан 1:1000 Расход элюента 200 мм3/мин , Ввод петлей 10          контрольный раствор, содержащий витамины А и Е;
мм3                                                                  раствор пробы.
       Светофильтр в канале возбуждения - А1, в канале               Особенностью методики является замена фильтров и
регистрации -А2                                               параметров регистрации в течение регистрации одной
       Чувствительность минимальная                           хроматограммы. Перед началом анализа в канал возбуждения
       Корр. опорн. нет                                       и регистрации помещают светофильтры 292 и Е2
       Корр. проп. есть                                       соответственно. Аликвотную порцию раствора (10 мм3)
       Размах шкалы        Ш=0.01-0.03                        дозируют при помощи петли в хроматографическую
       Вычитание фона      Ф=0.00                             установку и начинают элюирование в условиях, приведенных
       Сглаживание С=4                                        в п.8.1. После прохождения 1000 мл элюата (5 мин.)
       Диапазон концентраций ретинолпальмитата 0.2 до 2.0     останавливают детектор (нажатием клавиши F3 ), производят
мкг/см3                                                       замену светофильтров, устанавливая в каналы возбуждения и
       Время выхода ретинолпальмитата ~t уд - 3 мин           регистрации светофильтры А1 и А2 соответственно, изменяют
       Регистрируют не менее двух хроматограмм каждого        шкалу (Ш), усреднение (С), после чего снова запускают
раствора, измеряют высоты пиков компонента и находят          детектор (нажатием клавиши Ent). Во время смены
среднее ; арифметическое, если различие между полученными     светофильтров насос не отключают! После регистрации
величинами не превышает 10%. По полученным данным             изомеров ретинола хроматографирование заканчивают.
строят градуировочные зависимости высоты пика от                     9. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
концентрации компонента. Градуировочные графики должны               Содержание каждого из витаминов в пробе (Х, мг/см3)
быть линейны в рекомендуемом диапазоне и проходить через      вычисляют по формуле:
ноль, поэтому в последующих определениях можно