ВУЗ:
Составители:
Рубрика:
диапазона фракционирования данного типа геля,
определяют значения V
H
, V
o
, Vэ и рассчитывают их К. Для
калибровки колонок служат наборы чистых белков М
13700—669000 (табл. 1). На основании полученных данных
строят график (калибровочная кривая) зависимости К от lg М
этих белков. Молекулярную массу неизвестного белка
находят по графику интерполяцией, предварительно
определив его Vэ и рассчитав К.
Таблица 1. Белки, применяющиеся для калибровки гель-
фильтрационных колонок
Белок Молекулярная
масса
Стокс.
радиус,
нм
Источник
Рибонуклеаза А 13700 164 Поджелудоч
ная железа
Химотрипсиноген
А
25000
209 То же
Яичный
альбумин
43000
305
К
уриные яйца
Альбумин 67000 355 Сыворотка
быка
Альдолаза 158000 481
М
ышца
кролика
Каталаза 210000 _
П
ечень быка
Ферритин 440000
610 Селезенка
л
ошади
Голубой
декстран
2000000
Метод гель-фильтрации позволяет определять
молекулярные массы веществ в любых условиях, однако
точность его невелика.
Выбор типа геля и размеров колонки для
гельпроникающей хроматографии.
Для разделения смеси биополимеров выбирают гель
с интервалом фракционирования, верхний предел которого
значительно ниже, чем молекулярная масса самого
тяжелого вещества. Высокомолекулярные биополимеры
можно эффективно отделить от низкомолекулярных на
сефадексах G-25 (интервал фракционирования 10
2
- 5·10
3
)
или G-15 (интервал фракционирования 0 - 1,5·10
3
). Для
полного отделения низкомолекулярных веществ от
высокомолекулярных, например соли от белков, используют
гель с интервалом фракционирования, нижний предел
которого превышает молекулярную массу данного
соединения, а молекул с близкими массами — с интервалом
фракционирования, нижний предел которого больше
самых легких из них.
Степень разрешения какого-либо типа геля зависит от
размера его гранул и скорости протекания через колонку
элюирующего буферного раствора. Наибольшей степенью
разрешения обладают сверхтонкие и тонкие гели, однако
скорость протекания растворителя через них низкая и на
практике для разделения молекул чаще применяют средние
гели. Эффективность гельпроникающей хроматографии
существенно зависит от правильно подобранных размеров
колонки. При работе с тонкими и сверхтонкими гелями
сефадекса предпочтительны относительно короткие колонки.
Для обессоливания белков используют колонки высотой не
более 50—55 см, а для разделения белков или их
фрагментов, имеющих близкие молекулярные массы, —
колонки высотой до 200 см. Применение для гель-
диапазона фракционирования данного типа геля, Метод гель-фильтрации позволяет определять
определяют значения VH, Vo, Vэ и рассчитывают их К. Для молекулярные массы веществ в любых условиях, однако
калибровки колонок служат наборы чистых белков М точность его невелика.
13700—669000 (табл. 1). На основании полученных данных
строят график (калибровочная кривая) зависимости К от lg М Выбор типа геля и размеров колонки для
этих белков. Молекулярную массу неизвестного белка гельпроникающей хроматографии.
находят по графику интерполяцией, предварительно Для разделения смеси биополимеров выбирают гель
определив его Vэ и рассчитав К. с интервалом фракционирования, верхний предел которого
значительно ниже, чем молекулярная масса самого
тяжелого вещества. Высокомолекулярные биополимеры
Таблица 1. Белки, применяющиеся для калибровки гель- можно эффективно отделить от низкомолекулярных на
фильтрационных колонок сефадексах G-25 (интервал фракционирования 102- 5·103)
или G-15 (интервал фракционирования 0 - 1,5·103). Для
Белок Молекулярная Стокс. Источник
полного отделения низкомолекулярных веществ от
масса радиус,
высокомолекулярных, например соли от белков, используют
нм
гель с интервалом фракционирования, нижний предел
Рибонуклеаза А 13700 164 Поджелудоч
которого превышает молекулярную массу данного
ная железа
соединения, а молекул с близкими массами — с интервалом
209 То же
Химотрипсиноген 25000 фракционирования, нижний предел которого больше
А самых легких из них.
Яичный 43000 305 Куриные яйца Степень разрешения какого-либо типа геля зависит от
альбумин размера его гранул и скорости протекания через колонку
Альбумин 67000 355 Сыворотка элюирующего буферного раствора. Наибольшей степенью
быка разрешения обладают сверхтонкие и тонкие гели, однако
Альдолаза 158000 481 Мышца скорость протекания растворителя через них низкая и на
кролика практике для разделения молекул чаще применяют средние
Каталаза 210000 _ Печень быка гели. Эффективность гельпроникающей хроматографии
Ферритин 440000 610 Селезенка существенно зависит от правильно подобранных размеров
лошади колонки. При работе с тонкими и сверхтонкими гелями
Голубой 2000000 сефадекса предпочтительны относительно короткие колонки.
декстран Для обессоливания белков используют колонки высотой не
более 50—55 см, а для разделения белков или их
фрагментов, имеющих близкие молекулярные массы, —
колонки высотой до 200 см. Применение для гель-
