Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 4 стр.

фильтрации узких колонок нежелательно, так как в ходе      110— 120 см с резиновой муфтой на конце, колонка
элюирования возникают пристеночные эффекты, ведущие        стеклянная 100X2 см с ровным дном и со шлифом,
к резкому расширению хроматографических зон. При           соединительная тефлоновая трубка для колонки размером
работе с короткими и толстыми колонками трудно добиться    110—0,2 см, стекловолокно, кварцевый порошок или
равномерного нанесения образца на столб геля и             порошок из стекла пирекс с размерами частиц 1,5—
равномерного тока буферного раствора через гель, поэтому   2,0X1,5—2,0 мм, колба Бунзена (1000 мл) с резиновой
чаще всего применяют колонки, длина которых в 20—40        пробкой, перистальтический насос с соединительной
раз превышает их диаметр. На столб геля не следует         тефлоновой трубкой длиной до 1 м, пробирки (10 мл),
наносить раствор образца, плотность которого меньше        шприц (5 мл), химический стакан (1000 мл) миллиметровая
плотности элюирующего раствора. Объем образца не должен    бумага, штатив для крепления колонки, штатив для
превышать 5 % общего объема колонки. Оптимальная           пробирок, спектрофотометр, коллектор фракций, вакуумный
концентрация вещества в наносимом образце составляет       насос, водяная баня.
от 10 до 30 мг·мл -1 . Если необходимым требованиям           Натрий-фосфатные буферные растворы.
разделения одновременно удовлетворяют несколько типов       Приготовить матричные растворы фосфата            натрия
геля, то целесообразно выбрать тот из них, который         однозамещенного (А) и фосфата натрия двухзамещенного
обладает наименьшей величиной поглощения воды, т. е.       (Б): раствор А
имеет наибольшее количество поперечных сшивок.             фосфат натрия однозамещенный (NaH2 PO4 , M 156,1) 27,6 г
                                                           вода дистиллированная                         до 1000 мл
                                                           раствор Б
                                                           фосфат натрия двухзамещенный (Na2HPO4, M 395,16)28,38г
   Задание.        Подвергнуть       гельпроникающей
                                                           вода дистиллированная                          до 1000 мл
хроматографии на колонке с сефадексом (молселектом)
                                                           Натрий-фосфатный буферный раствор (0,02 моль/л,
G-75 белковые фракции, выделенные из различных органов
                                                           рН7,5):
крупного рогатого скота.
                                                           раствор А                                          16,0 мл
  Материалы и оборудование                                 раствор Б                                          84,0 мл
                                                           вода дистиллированная                          до 500 мл.
     Белковые фракции, выделенные из различных органов     ЗФР — натрий-фосфатный буферный раствор (0,02 моль/л)
крупного рогатого скота, дистиллированная вода, ЗФР        и хлорид натрия (0,13 моль/л). Приготовить матричный
(натрий-фосфатный буферный раствор, 0,04 моль/л) и         раствор:
натрия хлорид (0,26 моль/л, рН 7,5), 5 мл голубого         раствор А                                        128 мл
декстрана (1 мг/мл), сефадекс G-75 с размерами гранул      раствор Б                                        572 мл
40—120 мкм (10— 12 г), натрия азид или мертиолат,          хлорид натрия                                     30,4 г
дихлорэтан.                                                вода дистиллированная                       до 1000 мл.
  Мерный цилиндр (1000 мл), стеклянная палочка длиной           Для приготовления ЗФР к одному объему