Современные методы исследований в биохимии. Битуева А.В - 6 стр.

до шлифа элюирующий раствор. Конец гибкого капилляра       хроматографии. Сравнить кривые элюирования образцов,
колонки опустить вниз так, чтобы гидростатическое          сделать  вывод    о   молекулярных  массах   белков,
давление в колонке не превышало 25—30 см столба геля.      содержащихся в образцах.
Пропустить через колонку 200—300 мл элюирующего буфера
со скоростью 15—20 мл/ч. Поднять гибкий капилляр па
                                                               Контрольные вопросы
высоту колонки, отсосать шприцом с капилляром буфер
над столбом геля, оставив над фильтром 1,0—1,5 мм.             1.    В     чем    заключается     принцип      метода
Наслоить на гель 7—8 мл 1 %-ного раствора декстрана        гельпроникающей хроматографии? В чем преимущества
голубого (М 2·106). Опустить конец капилляра на 15—20      этого метода перед другими методами хроматографии?
см ниже уровня жидкости в колонке и дать декстрану              2. Какие гели-матрицы применяются для гель-
всосаться в гель, не допуская контакта фильтра с           фильтрации? Какие вы знаете виды и типы декстрановых
воздухом. Смыть остатки декстрана со стенок колонки 2—     гелей и каковы их интервалы фракционирования?
3 мл элюирующего раствора, отсосать шприцом с ка-              3. Дайте характеристику гелям на основе сефарозы,
пилляром и удалить. С момента нанесения голубого           сефакрила, биогелям, ультрогелям.
декстрана элюат собирать в сосуд для определения
свободного объема колонки.                                     4. Какие сефадексы нужны для эффективного
     Наслоить на столб геля 5 мл одного из образцов и      разделения белков с М 900 000, 150 000 и 70 000; 100 000,
дать всосаться в гель. Промыть стенки колонки              80 000 и 30 000?
элюирующим буфером (2 мл) и также дать ему всосаться в         5. Какие основные параметры гель-фильтрационной
гель, затем элюирующим раствором (5—7 мл) и, отсосав его   колонки? Что такое гель-фильтрационные диаграммы
шприцом с капилляром, удалить. Наслоить на гель            элюирования веществ?
элюирующий раствор до шлифа. Присоединить к колонке
                                                               6. Как определить молекулярную массу молекул методом
перистальтический насос.
                                                           гель-фильтрации? Каковы основные принципы выбора типа
     Элюирующий раствор пропускать через колонку со
                                                           геля, размеров колонки, условий элюирования?
скоростью 20 мл/ч. Элюат, до выхода из колонки голубого
декстрана, собирать в отдельный сосуд, измерить его             7. Какова разрешающая способность метода гель-
объем и таким образом определить свободный (наружный)      фильтрации?
объем колонки. Колонку после выхода декстрана голубого
подключить к коллектору фракций и собирать фракции по 5
мл. Собрав примерно 50 фракций, определить содержание в
них белка по поглощению в ультрафиолетовой области
спектра при 280 нм. Построить кривые элюирования (по
оси абсцисс значения А280 , по оси ординат — фракции)
каждого из образцов, подвергнутых гельпроникающей