Картирование генома и обратная генетика. Буторина А.К - 10 стр.

                                 10
микроскопических изображений – цифровых фотоаппаратов, соединенных
с микроскопом и компьютером (CCD-камер) вместо фотокамер. Одним из
наиболее разрешающих методов является многоцветная флуоресцентная
гибридизация или хромосомный пейнтинг (хромосомная живопись). Для
получения многоцветных изображений используют различные флуоро-
хромы, которыми метят разные зонды ДНК. Информация об интенсивно-
сти свечения каждого флуорохрома записывается на компьютере отдельно
и каждому из таких изображений присваивается свой собственный псевдо-
цвет. Одновременное использование нескольких флуорохромов позволяет
получить несколько псевдоцветов. Например, если фрагмент хромосомы,
окрашенный флуорохромом а, будет давать один псевдоцвет, фрагмент,
окрашенный флуорохромом b - другой, то фрагмент, окрашенный a и b од-
новременно, будет давать третий псевдоцвет. Использование n флуоро-
хромов позволяет одновременно определить локализацию 2n-1 фрагментов
ДНК. Например, применение пяти флуорохромов дает возможность анали-
зировать результаты одновременной гибридизации in situ 31 фрагмента
ДНК. Новая приборная база позволяет регистрировать сверхслабые свето-
вые сигналы, недоступные глазу человека и световые сигналы с длиной
волны, выходящими за пределы видимого света. При использовании трех
флуорохромов каждую хромосому человека можно окрасить в свой собст-
венный псевдоцвет. Окраска хромосомы более чем одним цветом свиде-
тельствует о наличии транслокации.
      Если сделать библиотеку фрагментов ДНК не из целой хромосомы, а
из отдельных участков индивидуальных хромосом, то можно идентифици-
ровать положение этих участков. В настоящее время в ряде диагностиче-
ских центров некоторые варианты многоцветной FISH используются в ка-
честве рутинных методов при анализе хромосомных перестроек у челове-
ка.
      В последние годы для сравнительного изучения геномов разных ви-
дов используется еще целый ряд новых методов по перекрестной гибриди-
зации ДНК одного вида с кариотипом другого. К их числу относится метод
Zoo-FISH (предложенный в 1990 году). Так, с использованием такого ме-
тода у нас в стране были выявлены зоны гомологии между хромосомами
человека и бурундука. По состоянию на 1998 год в мире проводили подоб-
ные сопоставления на более чем 200 видах млекопитающих. В результате
такой работы было установлено, например, что 17 хромосома человека яв-
ляется достаточно консервативной и имеет полную гомологию с соответ-
ствующими целыми хромосомами свиньи, быка, лошади, кошки или с це-
лыми плечами хромосом норки и тюленя, с отдельными сегментами хро-
мосом оленя мунжака, овцы, шимпанзе, макаки, кита-финвала.
      Для оценки геномного дисбаланса в клетках различных организмов в
настоящее время широкое распространение получил молекулярно-
цитогенетический метод – CGH (Comparative Gemomic Hybridization =
сравнительная геномная гибридизация), впервые описанный в 1992 Кал-
лиониеми с соавторами. Его применяют для идентификации и характери-