Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 19 стр.

     ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С В ОКРАШЕННЫХ ОБЪЕКТАХ
                       (по Бекеру)
   Принцип метода: 2,5-динитрофенилгидразин с дегидроаскорбиновой
кислотой дает соединение, образующее с серной кислотой осадок красного
цвета, интенсивность которого измеряют фотометрически.
                        Реактивы и аппаратура
   1. 2%-ная щавелевая кислота (С2О4Н2).
   2. Ацетатный буферный раствор, рН 5,4, который смешивают с 2%-ной
щавелевой кислотой в отношении 2:1 и разбавляют водой 1:1.
   3. 2,6-дихлорфенолиндофенол - ДИФ (0,2 г растворяют в 1000 см3 во-
ды, сосуд хорошо закрывают и хранят в холодильном шкафу).
   4. Уксусноамиловый эфир или хлороформ.
   5. 10%-ный раствор тиомочевины в водном спирте 1:1 (раствор неус-
тойчив).
   6. 2,4-динитрофенилгидразин - ДФГ (3 г растворяют в 100 см3 9 н. сер-
ной кислоты и фильтруют; устойчив около 4 недель).
   7. 85%-ная серная кислота.
   8. L-аскорбиновая кислота - АК (приготовляют стандартный раствор
для построения кривой растворением 0,60 г аскорбиновой кислоты в
200 см3 2%-ного раствора щавелевой кислоты).
   9. Центрифуга, объем пробирок 50 и 100 см3.
   10. Баня со льдом.
   11. Гомогенизатор.
                              Ход анализа
   Растительный материал измельчают под углекислым газом. Затем берут
определенную навеску, в которой должно содержаться около 5 мг аскор-
биновой кислоты, смешивают со 120 см3 2%-ной щавелевой кислоты, го-
могенизируют (2 минуты при 4 тыс. об/мин) и после тщательной промывки
стакана и ножа 2%-ной щавелевой кислотой доводят до определенного
объема. Экстракт взбалтывают и после центрифугирования берут пипеткой
5 см3 прозрачного раствора в другую центрифужную пробирку, в которую
уже заранее налито 12 см3 ДИФ; спустя полминуты - 10 см3 хлороформа и
взбалтывают до тех пор, пока лишняя краска не перейдет в органический
растворитель, который после центрифугирования удаляют. Из водной фазы
пипеткой берут в два стаканчика по 4 см3 жидкости, туда же добавляют 1
см3 ДФГ и каплю раствора тиомочевины; пробу ставят для реакции в тер-
мостат на 75 минут при 500. Второй химический стакан обрабатывают точ-
но так же, но без добавления ДФГ. После охлаждения в ледяной бане до-
бавляют еще 5 см3 85%-ной серной кислоты и спустя час измеряют экс-

18