Составители:
Рубрика:
18
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С В ОКРАШЕННЫХ ОБЪЕКТАХ
(по Бекеру)
Принцип метода: 2,5-динитрофенилгидразин с дегидроаскорбиновой
кислотой дает соединение, образующее с серной кислотой осадок красного
цвета, интенсивность которого измеряют фотометрически.
Реактивы и аппаратура
1. 2%-ная щавелевая кислота (С
2
О
4
Н
2
).
2. Ацетатный буферный раствор, рН 5,4, который смешивают с 2%-ной
щавелевой кислотой в отношении 2:1 и разбавляют водой 1:1.
3. 2,6-дихлорфенолиндофенол - ДИФ (0,2 г растворяют в 1000 см
3
во-
ды, сосуд хорошо закрывают и хранят в холодильном шкафу).
4. Уксусноамиловый эфир или хлороформ.
5. 10%-ный раствор тиомочевины в водном спирте 1:1 (раствор неус-
тойчив).
6. 2,4-динитрофенилгидразин - ДФГ (3 г растворяют в 100 см
3
9 н. сер-
ной кислоты и фильтруют; устойчив около 4 недель).
7. 85%-ная серная кислота.
8. L-аскорбиновая кислота - АК (приготовляют стандартный раствор
для построения кривой растворением 0,60 г аскорбиновой кислоты в
200 см
3
2%-ного раствора щавелевой кислоты).
9. Центрифуга, объем пробирок 50 и 100 см
3
.
10. Баня со льдом.
11. Гомогенизатор.
Ход анализа
Растительный материал измельчают под углекислым газом. Затем берут
определенную навеску, в которой должно содержаться около 5 мг аскор-
биновой кислоты, смешивают со 120 см
3
2%-ной щавелевой кислоты, го-
могенизируют (2 минуты при 4 тыс. об/мин) и после тщательной промывки
стакана и ножа 2%-ной щавелевой кислотой доводят до определенного
объема. Экстракт взбалтывают и после центрифугирования берут пипеткой
5 см
3
прозрачного раствора в другую центрифужную пробирку, в которую
уже заранее налито 12 см
3
ДИФ; спустя полминуты - 10 см
3
хлороформа и
взбалтывают до тех пор, пока лишняя краска не перейдет в органический
растворитель, который после центрифугирования удаляют. Из водной фазы
пипеткой берут в два стаканчика по 4 см
3
жидкости, туда же добавляют 1
см
3
ДФГ и каплю раствора тиомочевины; пробу ставят для реакции в тер-
мостат на 75 минут при 50
0
. Второй химический стакан обрабатывают точ-
но так же, но без добавления ДФГ. После охлаждения в ледяной бане до-
бавляют еще 5 см
3
85%-ной серной кислоты и спустя час измеряют экс-
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С В ОКРАШЕННЫХ ОБЪЕКТАХ (по Бекеру) Принцип метода: 2,5-динитрофенилгидразин с дегидроаскорбиновой кислотой дает соединение, образующее с серной кислотой осадок красного цвета, интенсивность которого измеряют фотометрически. Реактивы и аппаратура 1. 2%-ная щавелевая кислота (С2О4Н2). 2. Ацетатный буферный раствор, рН 5,4, который смешивают с 2%-ной щавелевой кислотой в отношении 2:1 и разбавляют водой 1:1. 3. 2,6-дихлорфенолиндофенол - ДИФ (0,2 г растворяют в 1000 см3 во- ды, сосуд хорошо закрывают и хранят в холодильном шкафу). 4. Уксусноамиловый эфир или хлороформ. 5. 10%-ный раствор тиомочевины в водном спирте 1:1 (раствор неус- тойчив). 6. 2,4-динитрофенилгидразин - ДФГ (3 г растворяют в 100 см3 9 н. сер- ной кислоты и фильтруют; устойчив около 4 недель). 7. 85%-ная серная кислота. 8. L-аскорбиновая кислота - АК (приготовляют стандартный раствор для построения кривой растворением 0,60 г аскорбиновой кислоты в 200 см3 2%-ного раствора щавелевой кислоты). 9. Центрифуга, объем пробирок 50 и 100 см3. 10. Баня со льдом. 11. Гомогенизатор. Ход анализа Растительный материал измельчают под углекислым газом. Затем берут определенную навеску, в которой должно содержаться около 5 мг аскор- биновой кислоты, смешивают со 120 см3 2%-ной щавелевой кислоты, го- могенизируют (2 минуты при 4 тыс. об/мин) и после тщательной промывки стакана и ножа 2%-ной щавелевой кислотой доводят до определенного объема. Экстракт взбалтывают и после центрифугирования берут пипеткой 5 см3 прозрачного раствора в другую центрифужную пробирку, в которую уже заранее налито 12 см3 ДИФ; спустя полминуты - 10 см3 хлороформа и взбалтывают до тех пор, пока лишняя краска не перейдет в органический растворитель, который после центрифугирования удаляют. Из водной фазы пипеткой берут в два стаканчика по 4 см3 жидкости, туда же добавляют 1 см3 ДФГ и каплю раствора тиомочевины; пробу ставят для реакции в тер- мостат на 75 минут при 500. Второй химический стакан обрабатывают точ- но так же, но без добавления ДФГ. После охлаждения в ледяной бане до- бавляют еще 5 см3 85%-ной серной кислоты и спустя час измеряют экс- 18
Страницы
- « первая
- ‹ предыдущая
- …
- 17
- 18
- 19
- 20
- 21
- …
- следующая ›
- последняя »