Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 20 стр.

тинкцию при 540 нм. Незадолго до того во второй стакан добавляют 1 см3
ДФГ.
   Для построения калибровочной кривой из стандартного раствора, со-
держащего 30 мкг АК в 1 см3, берут 5 проб. В первую добавляют 1 см3 рас-
твора аскорбиновой кислоты + 4 см3 2%-ной щавелевой кислоты, что со-
ставляет 30 мкг на 5 см3, затем в последующие приливают по 2 см3, 3 см3,
4 см3, 5 см3 аскорбиновой кислоты и щавелевой кислоты так, чтобы общий
объем раствора в каждой пробирке составлял 5 см3. Затем пробы просмат-
ривают на фотоэлектроколориметре и строят калибровочный график.

            МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ
          АСКОРБАТОКСИДАЗЫ, ПОЛИФЕНОЛОКСИДАЗЫ
                        И ПЕРОКСИДАЗЫ
                 (по Д.К. Асамову, С.Т. Рахимовой)
    В биохимических исследованиях чаще используются методы совмест-
ного определения активности аскорбатоксидазы и полифенолоксидазы, ос-
нованные на определении количества окисленной аскорбиновой кислоты.
Для определения аскорбиновой кислоты пользуются широко распростра-
ненным методом титрования с 2,6-дихлорфенолиндофенолом. Однако ме-
тод титрования имеет существенные недостатки: во-первых, окрашивание
раствора нестабильно, и поэтому трудно определить конец титрования; во-
вторых, результат титрования зависит от времени титрования, а также от
освещенности и т.д.
    Разработанный колориметрический метод определения аскорбиновой
кислоты позволил полностью избавиться от недостатков титрометрическо-
го метода и благодаря своей простоте и хорошей воспроизводимости ши-
роко применяется в биохимической практике. В этой связи данный метод
[1] использовался нами для определения активности аскорбатоксидазы,
полифенолоксидазы и пероксидазы [2].
    Для приготовления раствора краски - 2,6-дихлорфенолиндофенола - в
колбе объемом 100 мл растворяли 25 мг навески в теплой дистиллирован-
ной воде и добавляли 3-4 капли 0,01 н. раствора едкого натрия. Колбу
встряхивали до полного растворения краски, и объем раствора доводили до
метки водой.
    Взвешивали 50 мг чистой аскорбиновой кислоты и растворяли в 0,5 л
2%-ной метафосфорной кислоте. Из этого раствора брали по 0,5; 1; 1,5; 2;
2,5; 3; 3,5 мл и доводили до 50 мл 2%-ной метафосфорной кислотой. Как
известно, метафосфорная кислота является одним из лучших стабилизато-
ров аскорбиновой кислоты в растворе; кроме того, она легко осаждает
белки. Полученные растворы содержали соответственно 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7

                                                                      19