Физиологические и биохимические методы анализа растений. Чупахин Г.Н. - 22 стр.

корбиновой кислоты и пирокатехина. В контрольных пробах без встряхи-
вания определяли содержание аскорбиновой кислоты, как описано выше.
    После 30-минутного встряхивания в опытные пробы добавляли по 1 мл
20%-ной метафосфорной кислоты и определяли аскорбиновую кислоту. В
данном случае определяли суммарное действие аскорбатоксидазы и поли-
фенолксидазы, а об активности полифенолоксидазы судили по разности
между двумя определениями (активность полифенолоксидазы + аскорба-
токсидазы за вычетом активности аскорбатоксидазы).
    Для этого брали три колбы, в две из них вносили по 1 мл ферментной
вытяжки, приготовленной на буфере рН 7,5, добавляли 2 мл буферного
раствора рН 7,5, 2,5 мл 0,2%-ного раствора аскорбиновой кислоты, 2,5 мл
пирокатехина и 1 мл 0,09 М Н2О2. В третей колбе проводили контрольные
определения. В нее вносили 1 мл 20%-ной метафосфорной кислоты, 1 мл
ферментной вытяжки, 2 мл буфера рН 7,5 и те же количества аскорбиновой
кислоты, пирокатехина и перекиси. Об активности пероксидазы судили по
разнице между двумя определениями (полифенолоксидаза + пероксидаза
за вычетом активности полифенолоксидазы).
                              Литература
    1. Чупахина Г.Н. Количественное определение аскорбиновой кислоты коло-
риметрическим методом // Специальный практикум по биохимии и физиологии
растений. Томск: Изд-во ТГУ, 1974. С.27-31.
    2. Асамов Д.К., Рахимова С.Т. К методике определения активности аскорба-
токсидазы, полифенолоксидазы и пероксидазы // Актуальные вопросы физиоло-
гии, биохимии и биотехнологии. Ташкент: Изд-во ТГУ,1991.С. 122-126.

      ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АСКОРБИНАТОКСИДАЗЫ
   Аскорбинатоксидаза - фермент, катализирующий окисление аскорби-
новой кислоты в дегидроаскорбиновую. В состав этого фермента входит
медь (0,24%).
   Наиболее активная аскорбинатоксидаза обнаружена в капусте, огурцах,
тыкве, кабачках. Ее активность можно определять по интенсивности по-
глощения кислорода (в аппарате Варбурга), по измерению путём титрова-
ния остатка неокисленной аскорбиновой кислоты в среде и спектрофото-
метрически. Ниже приводится описание двух последних методов.
   Определение активности аскорбинатоксидазы ведут по измерению ос-
татка неокисленной аскорбиновой кислоты. Этот метод модифицирован
Л.К. Островской [1].
                       Реактивы и аппаратура
   1. Буферная смесь Мак-Ильвейна, рН 6.
   2. Раствор аскорбиновой кислоты (1мг в 1см3).
                                                                          21